[发明专利]通过手性高效液相色谱法分离测定甲苯磺酸依度沙班水合物与其异构体杂质的方法

说明书

本发明公开了一种通过手性高效液相色谱法分离测定甲苯磺酸依度沙班水合物与其异构体杂质的方法，采用以表面涂敷有纤维素‑三(4‑氯‑3‑甲基苯基氨基甲酸酯)的硅胶为填料的手性色谱柱，流动相为添加碱性添加剂的甲醇‑乙醇的混合溶液。采用本发明的方法，可以实现依度沙班与异构体Edox‑Ⅱ和Edox‑Ⅲ的完全分离，本方法操作方便，经过方法验证，方法专属性好，灵敏度高，精密准确，利用本发明的方法可以准确的进行甲苯磺酸依度沙班水合物原料药及其制剂的异构体Edox‑Ⅱ和Edox‑Ⅲ的定量分析，从而保证了甲苯磺酸依度沙班水合物及其制剂的质量可控性。

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体涉及用手性高效液相色谱法分离测定甲苯磺酸依度沙班水合物及其异构体杂质的方法。

背景技术

甲苯磺酸依度沙班水合物为日本第一三共株式会社研制的小分子口服抗凝药，为凝血因子X(FXa)阻滞剂，于2011年4月由日本厚生劳动省(MHLW)批准在日本上市，用于预防骨科大手术后静脉血栓栓塞包括膝关节全置手术、股关节全置手术以及股关节骨折手术，于2015年1月由美国食品药品管理局(FDA)批准以商品名Savaysa在美国上市，用于降低非瓣膜性心房颤动患者的卒中和系统性栓塞的风险。

甲苯磺酸依度沙班水合物结构中含有3个手性中心，应存在8个异构体，不同立体构型可能会产生不同的药理活性，从而可能具有不同的药效和毒副作用。手性异构体对药品的质量影响较大，因此对于甲苯磺酸依度沙班水合物中其他构型异构体的检测对其质量控制具有重要的意义。

根据其合成工艺分析，甲苯磺酸依度沙班水合物原料中可能含有的异构体为Edox-Ⅰ、Edox-Ⅱ和Edox-Ⅲ，结构见表1。

表1甲苯磺酸依度沙班水合物及其异构体信息表

其中Edox-Ⅰ可采用反相HPLC法分离检测，Edox-Ⅱ和Edox-Ⅲ在反相条件下无法实现分离，需采用手性色谱柱进行拆分。

目前甲苯磺酸依度沙班水合物的文献报道多为药理作用、临床评价、合成方法等。有文献报道用手性HPLC法拆分其他沙班类药物，文献《利伐沙班及其光学异构体的HPLC法分离与测定》(中国医药工业杂志,2015,46(11):1220-1222)报道崔萍等用研创IB手性柱拆分了利伐沙班及其光学异构体。文献《HPLC法测定利伐沙班中对映异构体的含量》(中国药师,2014,17(10):1629-1631.)报道张倩如等用Chiralpak IA手性柱拆分了利伐沙班及其对映异构体，但目前尚未见甲苯磺酸依度沙班水合物异构体检测的文献报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种通过手性高效液相色谱法分离测定甲苯磺酸依度沙班水合物与其异构体杂质的方法，可以将甲苯磺酸依度沙班水合物异构体杂质为Edox-Ⅱ与Edox-Ⅲ进行有效分离，从而可以准确控制甲苯磺酸依度沙班水合物的质量，从而实现甲苯磺酸依度沙班水合物与其异构体杂质的分离测定。

本发明所用的液相色谱方法分离测定甲苯磺酸依度沙班水合物(Edox)与其异构体杂质的方法，采用以表面涂敷有纤维素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)的硅胶为填料的手性色谱柱，以添加碱性试剂的甲醇-乙醇混合溶液作为流动相，甲醇-乙醇体积比为30:70～50:50，碱性试剂与甲醇-乙醇混合溶液的体积比为0.05％～0.5％。

上述所说的手性色谱柱选自牌号DAICEL CHIRALCEL OX-H手性色谱柱(规格4.6mm×250mm，5μm)。

本发明的碱性添加剂选自以下溶剂二乙胺、丁胺或乙醇胺，优选的碱性添加剂为二乙胺。

本发明所述的方法，其流动相甲醇-乙醇的混合溶液配比为30:70～50:50，优选的配比为40:60。