[发明专利]利用酶辅助络合萃取法从长春花中提取分离长春质碱的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从长春花中高效提取长春质碱的方法，具体涉及一种利用酶辅助络合萃取法从长春花中提取分离长春质碱的方法。

背景技术

长春花(Catharanthus roseus)是夹竹桃科长春花属一种重要的药用植物，原产南亚、非洲东部及美洲热带。在我国主要分布于江苏、浙江、福建、江西、四川及河南等地。长春花全草均可入药，含有长春碱、文多灵、长春质碱、阿玛碱、蛇根碱、长春新碱等多种萜类吲哚生物碱，具有很高的药用价值。其中，长春质碱不仅具有抗肿瘤活性，还具有降血糖、血压、镇痛等作用，同时，长春质碱还是合成长春瑞滨、长春氟宁等长春碱类抗肿瘤药物的中间体。

国内外对提取分离长春花生物碱的研究由来已久，但是由于长春花中吲哚生物碱种类较多，且在植物中的含量很低，一般都在万分之几，因此长春花中吲哚生物碱的提取分离成为制约长春碱类药物工业化发展的瓶颈。目前，我国相关企业的提取技术得率低、资源浪费大，且产品质量达不到国际标准(纯度>98％)，只能生产纯度较低的粗提物或原料药，很难满足国际市场的需求。少数企业产品质量虽能达到要求，但得率低，造成了大量的资源浪费和严重的环境污染。此外，由于我国野生长春花的过度采收，长春花的资源储量大量锐减，已经处于濒危的边缘，长春花生物原料的匮乏也严重制约长春碱类药物产业的发展。因此如何提高长春花生物资源的利用率，开发高效分离纯化长春花类生物碱的方法，已经成为当务之急。

在植物活性成分提取过程中，由于植物细胞外存在较厚细胞壁，细胞内部的目标产物不容易释放到溶剂中，阻碍了有效成分的提取率。利用生物酶等可以破坏植物细胞外结构，提升目标成分的溶出率。

萃取分离法以其分离效率高、生产能力大，便于快速连续和安全操作以及能耗低等优点被广泛研究。根据萃取原理，在萃取操作中，萃取剂与溶质之间不发生化学反应的萃取称为物理萃取；萃取剂和溶质之间发生化学反应的萃取成为化学萃取。根据溶质与萃取剂之间发生的化学反应机理，化学萃取还可大致分为五类：络合反应、阳离子交换反应、离子缔合反应、加和反应和带同萃取反应等。络合萃取是基于可逆络合反应的原理，溶液中待分离溶质与含有络合剂的萃取剂接触，络合剂与待分离溶质发生反应形成络合物，并使其转移至萃取相内。然后，根据溶剂摆动效应，进行反萃，溶质得以回收，萃取剂循环使用。因此，络合萃取法具有高效性、高选择性和成本低的优点，可以用于长春花中长春碱类生物碱的分离纯化。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的目的是提供一种简单、高效的利用酶辅助络合萃取法从长春花中提取分离长春质碱的方法。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

利用酶辅助络合萃取法从长春花中提取分离长春质碱的方法，包括以下步骤：

(1)酶辅助超声提取

取长春花地上部分阴干并粉碎，得到长春花干粉，加入混合酶液孵化，过滤，留长春花粉末，在长春花粉末中加入乙醇，并用盐酸调节pH至5.6-6.8，超声提取；过滤，留提取液，将提取液减压浓缩，得到浓缩液；

(2)络合萃取富集

以二(2-乙基己基)磷酸作为络合剂，石油醚作为稀释剂，组成萃取体系，对浓缩液进行络合萃取，分离上层液，得到富含长春质碱的萃取液；

(3)反萃分离

将富含长春质碱的萃取液用稀盐酸反萃，稀盐酸层减压浓缩后，冷冻干燥，得到长春质碱粗品；

(4)纯化

将所得的长春质碱粗品进行重结晶，即得。

步骤(1)中的混合酶液包括：纤维素酶3-6U/ml、果胶酶4-8U/ml和半纤维素酶6-9U/ml。

步骤(1)中的混合酶液pH为4.0-7.0，混合酶液中还包括金属离子Fe²⁺、Co²⁺、Mn²⁺、Ca²⁺中的一种或多种，金属离子的总质量分数为1％。

所述孵化的温度为25-50℃，时间为4-6h。

所述乙醇的加入量为5倍过滤得到的长春花粉末的重量，乙醇的体积分数为70-80％。

步骤(1)中超声提取3-4次，每次4-6h。

步骤(1)和(3)中减压浓缩的真空度为﹣0.9MPa，转速为150-180转/秒。

步骤(2)中二(2-乙基己基)磷酸和石油醚的体积比为1:1-3，萃取体系和浓缩液的体积比为1-3:1，萃取次数为3-5次。

步骤(3)中稀盐酸的质量分数为1-3％，稀盐酸与萃取液的体积比为1-3:1，反萃次数为3-5次。