[发明专利]适用于H7N9禽流感病毒实时荧光定量PCR检测的质粒标准物质

权利要求书

1.一种适用于H7N9禽流感病毒实时荧光定量PCR检测的质粒DNA标准物质，其特征在于，所述质粒DNA标准物质包含检测序列，所述检测序列的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示。

2.如权利要求1所述的质粒DNA标准物质，其特征在于，所述质粒DNA标准物质的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.2所示。

3.一种利用如权利要求1或2所述的质粒DNA标准物质的定量方法，其特征在于，其包括以下步骤：

①提取如权利要求1或2所述的质粒DNA标准物质；

②根据步骤①所得的质粒标准分子的碱基组成和序列长度，计算质粒标准分子中的磷元素的含量；

③配制梯度浓度的磷标准溶液，并作出高分辨电感耦合等离子体发射质谱的标准曲线；

④高分辨电感耦合等离子体发射质谱检测，并根据步骤③所得的标准曲线得出质粒标准分子溶液的磷含量；

⑤根据步骤④所得的质粒标准分子溶液的磷含量和步骤②所得的质粒标准分子中的磷元素的含量，计算出质粒标准分子的浓度。

4.一种定量如权利要求1或2所述的质粒DNA标准物质的方法，其特征在于，所述方法紫外分光光度法或高分辨电感耦合等离子体质谱法。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述紫外分光光度法包括以下步骤：

①提取如权利要求1或2所述的质粒DNA标准物质；

②将紫外分光光度计校正为零点；

③取DNA至比色杯中，记录仪器读数。

6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述高分辨电感耦合等离子体质谱法包括以下步骤：

①提取如权利要求1或2所述的质粒DNA标准物质；

②计算步骤①中各质粒标准分子的磷元素的含量；

③配制梯度浓度的磷标准溶液，并作出高分辨电感耦合等离子体发射质谱的标准曲线；

④高分辨电感耦合等离子体发射质谱检测，并根据步骤③所得的标准曲线得出步骤①中质粒标准分子的磷含量；

⑤根据质粒标准分子的磷含量计算出质粒标准分子的浓度。

7.一种H7N9禽流感病毒实时荧光定量PCR的检测方法，其特征在于，其所采用的标准物质是权利要求1或2所述的质粒DNA标准物质。

8.一种如权利要求7所述的检测方法，其特征在于，将权利要求1或2所述的质粒DNA标准物质作为阳性标准物质，建立标准曲线后，进行H7N9禽流感病毒的实时荧光定量PCR检测。

9.一种如权利要求1或2所述的质粒DNA标准物质的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：

①人工合成检测序列，所述检测序列的核苷酸序列如序列表中SEQ IDNO：1所示；

②将步骤①所得的检测序列克隆至载体上，即可。

10.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述载体为pMD19-T。