[发明专利]链格孢毒素链格孢酚单甲醚胶体金免疫层析试纸条

权利要求书

1.检测链格孢毒素链格孢酚单甲醚(AME)的胶体金免疫层析试纸条，包括样品垫、胶体金结合垫、NC膜、吸水垫和PVC底板，其特征在于，胶体金结合垫上包被有胶体金-AME单抗复合物；

所述胶体金-AME单抗复合物中AME单抗的制备方法如下：

(1)AME羧基化衍生物半抗原制备：将AME，溴丁酸甲酯和碳酸钾溶于甲酰胺溶液，50℃磁力搅拌反应2h；待反应混合物冷却后，加水稀释，随后用酒精进行萃取得到沉淀中间产物；将沉淀溶于甲醇和四氢呋喃混合液，随后加入到含有氢氧化锂的水溶液中，室温条件下反应5h，得到羧基化修饰的AME半抗原；

(2)AME-BSA抗原制备：将AME半抗原溶于N,N-二甲基甲酰胺中；加入二环己基碳二亚胺搅拌；加入N-羟基琥珀酰亚胺，室温避光磁力搅拌；离心，除去沉淀物N,N′-二环已基脲；将上清液逐滴加到由磷酸缓冲液配制的BSA溶液中，室温避光搅拌；用0.1mol/L的PBS溶液透析3d，每天换液3次，即得AME-BSA抗原；

(3)抗体筛选与纯化。

2.根据权利要求1所述的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，NC膜上设置了检测线和质控线；所述检测线上固定有AME-OVA偶联抗原，浓度为1mg/mL。

3.根据权利要求2所述胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，所述质控线上固定有羊抗鼠二抗，浓度为1mg/mL。

4.根据权利要求1～3任一项所述胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，所述胶体金-AME单抗复合物的制备方法如下：用还原剂将氯金酸还原成胶体金纳米颗粒；将胶体金与AME单抗混合孵育30min，加入10％的BSA溶液使其终浓度为1％，反应20min后，加入10％的PEG20000并使其终浓度为0.2％，继续反应20min；离心纯化、浓缩产生胶体金-AME单抗复合物；

以上百分比均指质量/体积的百分数。

5.根据权利要求4所述的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，所述AME单抗与胶体金的最佳结合量为7.2μg/mL。

6.根据权利要求4所述的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，所述AME单抗与胶体金的最佳结合pH值为8.0。

7.根据权利要求5或6所述胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，所述胶体金的纳米颗粒大小为13～40nm。

8.根据权利要求7所述胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，所述胶体金的纳米颗粒大小为18nm。

9.根据权利要求1～3或5、6、8任一项所述的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，所述试纸条的宽度为4～5mm。

10.权利要求1～9任一项所述的胶体金免疫层析试纸条在检测链格孢毒素链格孢酚单甲醚中的应用。