[发明专利]一种建立葵花盘HPLC标准指纹图谱的方法

说明书

技术领域

本发明属于分析化学技术领域，尤其涉及一种建立葵花盘HPLC标准指纹图谱的建立方法。

背景技术

现在中药材产量越来越少，急待开发新的材料。葵花盘是向日葵脱去籽实后的向日葵盘，是向日葵的副产品，产量约占向日葵籽实产量的20％，在向日葵主产区是一项巨大资源。

葵花盘治头痛，目昏，牙痛，胃、腹痛，妇女月经痛，疮肿。药理作用表明葵花盘的乙醇浸出液对麻醉猫静脉注射，可有显著的降低血压作用。临床用药表明，取葵花盘适量，加水煎成膏状，外敷对无名肿毒、风湿性关节炎、肩关节周围炎有一定疗效；取葵花盘晒干切碎，炒焦，研末。用白酒或开水加糖冲服，可用于治疗乳腺炎；用葵花盘3两和凤尾草2两，水杨梅(全草)2两，水煎1～2小时成半胶冻状，口服，对肿瘤有一定的疗效；且有动物实验证明，葵花盘乙醇浸出液有显著的降压作用。

指纹图谱技术已成为国际公认的控制重要或天然药物质量的最有效手段之一，它可以较全面、准确、直观地反应多种成分在中药或其制剂中的分布，是一种综合的、宏观的、可量化的鉴别方法。运用指纹图谱技术，通过对谱图中主要特征峰的识别和/或比例的测定，可有效鉴别药材的真伪。但是，有关葵花盘的指纹谱图尚未见报道。

因此，建立起葵花盘的指纹图谱方法，对于评价葵花盘的质量具有重要意义。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种建立葵花盘HPLC标准指纹图谱的方法，具体采用如下技术方案：

一种建立葵花盘HPLC标准指纹图谱的方法，包括采用HPLC方法对5-15个批次葵花盘的提取物进行检测获得指纹图谱的步骤，所述HPLC方法以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂，以乙腈为流动相A相，0.2-0.6％磷酸水溶液为流动相B相，按如下条件进行梯度洗脱：

其中，所述梯度洗脱中，30～35min，“9→80”代表的含义是，流动相A的比例由9％逐渐增加至80％，“91→20”代表的含义是，流动相B的比例由91％逐渐降低至20％；其他时间段的含义与之类似。

标准指纹图谱确定过程中，要充分注重各个构成指纹特征峰的前后顺序，相互关系，以及整体面貌特征，发明人对葵花盘提取物的制备方法进行了大量研究，发现提取物的制备方法对最终标准指纹图谱的形态有着很大的影响，具体而言，当只用水方法提取时，存在着提取得到的成分过多，所得到的图谱色谱峰过多，峰与峰之间不能有效分离的问题；当只以醇提取时，存在着部分成分不能有效被提取出来，所得到的图谱存在着色谱峰过少的问题。此外，提取成分过多不利用于病人服用，提取成分过少则不能达到治疗目的。

发明人经过研究，最终确定了如下葵花盘提取物的提取方法，即：先用水提取葵花盘，然后用乙醇沉淀所得的提取液，取上清液浓缩成稠膏，干燥，粉碎，即得。

以采用此种方法提取得到的物质作为供试品进行检测，最终得到的标准指纹图谱中各特征指纹峰的前后峰之间能有效分离，符合检验要求，该标准指纹图谱能够更加准确地表征葵花盘的质量，有利于全面监控产品的质量，为药品的质量检测提供可靠的依据。且本发明所述的方法具有操作简单，色谱峰之间分离度符合要求的特点。

优选地，所述葵花盘的提取物通过如下方法提取得到：粉碎葵花盘至粒径为0.5-1.5cm，加入相当于葵花盘重量8-10倍的水，提取2-4次，每次1-3h，浓缩提取液，向所得浓缩液中加入乙醇沉淀，离心，取上清液，除去乙醇浓缩成稠膏，干燥，粉碎，即得。

进一步优选地，所述葵花盘的提取物通过如下方法提取得到：取葵花盘，粉碎至粒径为1cm，分别加入相当于葵花盘重量10、8、8倍的水，提取3次，每次2小时；分别滤过，合并滤液，浓缩至相对密度1.06(20℃)，加乙醇使含醇量为65％，静置24小时，离心，取上清液，除去乙醇浓缩成稠膏，干燥，粉碎，即得。

其中，所述“含醇量”指的乙醇在溶液中的体积百分数。

本发明所述的HPLC方法采用紫外检测器，检测波长为320-330nm；和/或，流速为0.8-1.2mL/min；和/或，柱温为28-32℃。

优选地，检测波长为327nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃。

最优选地，本发明建立所述标准指纹图谱的方法包括如下步骤：

(1)供试品溶液的制备：称取5-15个批次的葵花盘提取物，分别以甲醇为溶剂，配制成浓度为10-50mg/mL的供试品溶液；

(2)HPLC测定：采用如下HPLC方法对5-15个所述供试品溶液进行检测，得到指纹图谱；