[发明专利]一种同时测定连花清瘟胶囊中六种环烯醚萜苷类成分的方法

说明书

技术领域

本发明属于医药分析技术领域，具体涉及一种同时测定连花清瘟胶囊中六种环烯醚萜苷类成分的方法。

背景技术

连花清瘟胶囊是2003年“非典”期间通过国家绿色通道审批的新药，是在中医络病理论指导下，汲取古代中医药智慧，结合现代抗病毒、抑菌、提高免疫等研究成果创制而成的中成药。连花清瘟胶囊是国家中药保护品种，其主要功效为清瘟解毒，宣肺泄热。用于治疗流行性感冒属热毒袭肺证，近年来，多家科研机构对连花清瘟胶囊进行了大量科学研究，证明了它的广谱抗病毒作用，尤其对甲型流感病毒(H1N1、H3N2)、禽流感病毒(H5N1、H9N2)、乙型流感病毒、腺病毒、疱疹病毒等均有较强抑制杀灭作用。此外，这一药物还可有效抑制多种细菌。因其疗效显著，已被列入国家中药保护品种。2015年，连花清瘟胶囊获批进入美国FDA进行二期临床研究。

连花清瘟胶囊以连翘、金银花、炙麻黄、炒苦杏仁、石膏、板蓝根、绵马贯众、鱼腥草、广藿香、大黄、红景天等十余味中药配伍精制而成，成分相对复杂，产品质量受原料药影响很大。因此如何建立一套评价体系，提高连花清瘟胶囊等中成药质量控制水平，对于临床应用具有重要意义。

在连花清瘟胶囊中，金银花等药材中含有丰富的环烯醚萜苷类化合物，近年来，不断有研究证明，环烯醚萜苷类化合物具有抗病毒、抗菌、抗氧化、保肝利胆、抗肿瘤、抗炎、增强免疫等多种活性，因此开展对连花清瘟胶囊中环烯醚萜苷类成分的高效提取和分析方法研究，对进一步研究其作用机制、建立质量标准，提高药材及相关成药质量控制水平显然具有重要意义。然而由于连花清瘟胶囊所含化学成分种类较多、极性差异大，包含黄酮、有机酸、环烯醚萜苷、皂苷等多种化学成分；同时，且加工过程中药用辅料的使用，造成其化学成分更为复杂。因此，结合环烯醚萜苷类成分的结构特点，发展适合金银花成药中环烯醚萜苷类成分的快速、高效的提取、净化和分析方法亟待解决。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明提供一种同时测定连花清瘟胶囊中六种环烯醚萜苷类成分的方法，所述六种环烯醚萜苷为马钱酸、莫诺苷、马钱苷、当药苷、断氧化马钱子苷和开联番木鳖苷二甲基乙缩醛的方法，该方法操作简便、样品净化效果好，分析结果准确且重复性好。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种同时测定连花清瘟胶囊中六种环烯醚萜苷类成分的方法，测定的六种环烯醚萜苷类成分是马钱酸、莫诺苷、马钱苷、当药苷、断氧化马钱子苷和开联番木鳖苷二甲基乙缩醛，具体步骤如下：

(1)取出连花清瘟胶囊中药粉，称取一定量药粉待用；

(2)向步骤(1)中的药粉中加入提取溶剂，摇匀后进行超声提取得上清液；

(3)向步骤(2)中的上清液中加入净化剂，涡流振荡；

(4)经步骤(3)处理后的上清液用微孔滤膜过滤得提取液；

(5)分别精密称取马钱酸、莫诺苷、马钱苷、当药苷、断氧化马钱子苷、开联番木鳖苷二甲基乙缩醛对照品，加50％甲醇溶解，制成浓度为200μg/mL混合标准溶液；使用时，按一定比例逐级稀释，待用。

(6)将步骤(4)得到的提取液进行高效液相色谱分析，色谱条件如下：色谱柱：Kromasil C₁₈(4.6×250mm，5μm)；流速：0.5-1.0mL/min；检测波长：200-250nm；柱温：25-30℃；流动相：0.4％甲酸水溶液-乙腈，梯度洗脱；

(7)以外标法进行连花清瘟胶囊中六种环烯醚萜苷类成分的定量分析，即以已知浓度的环烯醚萜苷类的色谱峰面积比对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线，对提取液进行测定，测得检出提取液中六种环烯醚萜苷类成分的色谱峰面积，代入标准曲线，求得连花清瘟胶囊中马钱酸、莫诺苷、马钱苷、当药苷、断氧化马钱子苷和开联番木鳖苷二甲基乙缩醛的含量。

优选的，所述步骤(2)中提取溶剂为50％乙醇；所述药粉与提取溶剂的质量体积比1g:30-50ml，进一步优选的，所述药粉与提取溶剂的质量体积比为1g:40ml；

优选的，所述步骤(2)中超声提取时间为0.5-2min，进一步优选的，超声提取时间为1min；

优选的，所述步骤(3)中加入的净化剂为硅藻土和活性炭混合物；进一步优选的，所述硅藻土和活性炭的质量比为90：10；

优选的，所述步骤(3)中所述净化剂与上清液的质量体积比为45-55g:1ml；进一步优选的，所述净化剂与上清液的质量体积比为50g:1ml；