[发明专利]一种分离测定唾液中有机酸和脂肪酸物质的方法

说明书

技术领域

本发明属于分析化学技术领域，具体涉及一种专用于分离测定唾液中有机酸和脂肪酸物质的方法。

背景技术

食品中有机酸和脂肪酸是食品香吃味的主要来源，它们的含量及相互比例对色、香、味乃至质量和风格均有着直接影响。对食品中有机酸和脂肪酸的研究，通常是直接测定食品中这些组分的含量。然而，食品饮食过程中，被口腔唾液选择性溶解吸收的成分才是刺激人体产生感官感受的物质，决定了食品的风格和风味。研究测定饮食者唾液中吸收溶解的有机酸和脂肪酸成分，则能更直接、客观的得到决定食品风味的化学成分数据，不仅可为食品、烟草等的香吃味评定提供数据支持，还可为改善食品风味提供理论依据。

目前，测定不同基质、样品中有机酸或脂肪酸已有大量报道，然而唾液样品中有机酸和脂肪酸物质的测定还未见报道。唾液样品基体复杂，主要成分是水（占99%），但含有多种有机物如黏蛋白、黏多糖、唾液淀粉酶、溶菌酶、免疫球蛋白、血型物质、尿素、尿酸和游离氨基酸等，以及无机物和一些气体分子，被分析成分在唾液中含量极低，还会受到唾液中多种有机成分和无机成分的干扰。因此，开发简单快速、高选择性、高灵敏度、定量准确的唾液中有机酸和脂肪酸物质的提取和分离测定方法非常迫切。

发明内容

本发明的目的在于针对目前唾液中有机酸和脂肪酸物质分离测定的方法未见文献报道的现状，以及现有技术的不足，提供一种分离测定唾液中有机酸和脂肪酸物质的方法，该方法可行，精密度好，检出限低，准确可靠，具有推广应用价值。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种分离测定唾液中有机酸和脂肪酸物质的方法，包括以下步骤：

步骤（1），样品采集：将脱脂棉置于口腔内，放置0.2-5 min后，取出吸收了唾液的脱脂棉，置于注射器针筒中，利用注射器推杆推移挤压，挤出液收集于离心管中，经高速离心后，收集上清液得到唾液样品；

步骤（2），盐析萃取：移取唾液样品于离心管中，加入甲醇、氯化钠、萃取用盐和pH调节剂，经涡旋振荡至混合均匀后离心，取甲醇所在的萃取液层，得到第一萃取液；

甲醇加入量与唾液样品的体积比为0.5-2：1；氯化钠的加入质量为唾液样品质量的5-20%；

所述的萃取用盐为无水硫酸镁和无水硫酸钠中的一种或两种的组合物；萃取用盐的加入质量为唾液样品质量的40-70%；当为组合物时，无水硫酸镁和无水硫酸钠的之间的比例没有具体限制；

pH调节剂为液体酸或缓冲盐，液体酸为盐酸、硫酸、甲酸和乙酸中的一种或几种的组合（当为组合物时，各组分的之间的比例没有具体限制），缓冲盐为柠檬酸钠和柠檬酸氢二钠中的一种或两种的组合（当为组合物时，各组分的之间的比例没有具体限制）；液体酸的加入体积是唾液样品体积的0.01-1%，缓冲盐的加入质量是唾液样品质量的10-25%；

步骤（3），甲酯化：将步骤（2）得到的第一萃取液中加入促甲酯化反应试剂后在50-80℃下的密闭条件进行甲酯化反应，反应完成后，加入饱和食盐水和萃取溶剂进行萃取，取萃取液层并用水洗至中性，加入干燥剂进行干燥，得到第二萃取液；

所述的促甲酯化反应试剂为硫酸、盐酸、氢氧化钾或三氟化硼，加入体积为步骤（2）得到的第一萃取液体积的5-40%；所述的饱和食盐水的体积是步骤（2）得到的第一萃取液体积的50-200%；

所述的萃取溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、正己烷或环己烷；每次萃取萃取溶剂的体积是步骤（2）得到的第一萃取液体积的25-100%；

所述的干燥剂为无水硫酸镁或无水硫酸钠；干燥剂的质量是步骤（2）中萃取溶剂质量的5-25%；

步骤（4），测定：将步骤（3）得到的第二萃取液，在30-45℃下浓缩至近干后，用正己烷复溶，正己烷的用量为步骤（2）移取唾液样品体积的10-200%，过0.22 μm微孔滤膜，滤液采用气相色谱-质谱联用法分析，外标法定量，根据标准曲线计算目标物含量。

进一步，优选的是步骤（1）中的脱脂棉的质量为0.2-2.0 g。

进一步，优选的是步骤（1）中唾液离心转速不低于10000 rpm，离心时间不少于10 min。

进一步，优选的是步骤（2）中唾液移取量为0.5-10 mL，涡旋振荡转速为100-20000 rpm，涡旋振荡时间为0.5-10 min，离心转速不低于10000 rpm，离心时间不少于5 min。