[发明专利]25‑羟基维生素D2和25‑羟基维生素D3高效液相色谱质谱联用法检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及质谱检测领域，具体地涉及25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3高效液相色谱质谱联用法检测试剂盒

背景技术

维生素D为固醇类衍生物，麦角甾醇、麦角骨化醇，具有抗佝偻病作用，又称抗佝偻病维生素维生素D家族成员包括维生素D1、D2、D3、D4和D5，对健康关系较密切的是D2(麦角钙化醇)和D3(胆固化醇)它不仅仅只是一种脂溶性维生素，本质上是具多种生理活性的一种激素，具有广泛的生理代谢活性维生素D缺乏会引起佝偻病、手足抽搐、软骨病等疾病，但是长期摄入过多的维生素D，将引起血管和器官钙化因此定期检测人体内维生素D的水平，对于衡量人体维生素D补充效果，及维持人体健康具有重要的意义

维生素D可以通过皮肤合成或者食物摄取来产生维生素D半衰期约3小时,并与维生素D结合蛋白在一起；1,25-(OH)2维生素D2/D3半衰期约24小时,在血中含量极低；25-羟基维生素D是血中被检测的标志物，因为它半衰期约为3周,较为稳定,又是人体内维生素D的主要储存形式，通过检测它可以确定总体维生素D的情况维生素D是维持骨骼健康的主要元素儿童期维生素D的严重缺乏将导致骨骼畸形，即佝偻病维生素D缺乏是继发性甲状旁腺机能亢进症的常见病因25-羟基维生素D含量低还与骨密度低有关与其他临床资料结合，检测结果有助于判定骨代谢近年来发现维生素D与癌症、心血管疾病、糖尿病等都有相关性，足量的体内维生素D水平对癌症、多发性硬化症、糖尿病等有一定预防作用

维生素D缺乏的人群可以通过食物、阳光及维生素补充剂提高体内维生素D含量，食物来源包括蛋黄，三文鱼，金枪鱼，鱼肝油，牛肝，人造奶油，酸奶，奶酪等；补充剂提供的维生素D包含两种形式：D2和D3两种形式都有效，每一种都可以保证充足的维生素D水平但是2和3是不等同的D3是人体产生的形式，最近有研究表明D3在快速提高维生素D水平上可高达3倍，而且能维持更加长久补充剂量取决于年龄和危险因素推荐的膳食标准是70岁老人为600IU/天，71及以上为800IU/天一些研究人员提出，维生素D含量高可带来多种健康益处，但是太多会造成伤害根据美国医学研究所，超过4000IU/天，危害的风险会增加

25(OH)D2和25(OH)D3活性和治疗效果差异大，维生素D3应作为首选补充剂，但维生素D2也不可或缺，分开检测是单独评价维生素D2和维生素D3活性及功能是必然要求；仅检测25-羟基维生素D3会导致总25-羟基维生素D水平不准确，分别检测25-羟基D2/D3才能正确评估维生素D水平和维生素D补充疗法的疗效因此，分别测定25-羟基维生素D2/D3可以直接反映生物体内维生素D真实活性的水平，具有重要的临床意义和疗效判定意义

然而，现有技术中虽然有一些针对25(OH)D2和25(OH)D3的检测方法，但是往往操作较为复杂(如需要萃取步骤)、检测灵敏度较低，并且难以同时定量检测25(OH)D2和25(OH)D3

因此，本领域迫切需要开发新的检测灵敏度较高并且能够同时定量检测25(OH)D2和25(OH)D3的技术

发明内容

本发明的目的就是提供一种检测灵敏度较高并且能够同时定量检测25(OH)D2和25(OH)D3的技术

在本发明的第一方面，提供了一种高效液相色谱质谱联用法检测试剂盒，包括：

(1)质控品，所述的质控品中含有25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3；

(2)同位素内标提取液，所述的同位素内标提取液中含有25-羟基维生素D2-d3和25-羟基维生素D3-d3；

(3)稀释液，所述的稀释液为乙腈；

(4)转化液，所述的转化液为PTAD(4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮)；

(5)复溶液，所述的复溶液为甲醇；

(6)流动相添加剂A，所述的流动相添加剂A为饱和一元羧酸；

(7)流动相添加剂B，其中所述的流动相添加剂B为C1-C3胺化合物

在另一优选例中，所述的C1-C3胺化合物选自下组：甲胺、乙胺、丙胺、或其组合

在另一优选例中，所述试剂盒还包括选自下组的部件：

96孔反应板、说明书

在另一优选例中，所述的试剂盒还包括选自下组的部件：

对照品用于建立标准曲线

在另一优选例中，所述的流动相添加剂B为甲胺

在另一优选例中，所述饱和一元羧酸为甲酸、乙酸、丙酸、丁酸或其组合

在另一优选例中，所述饱和一元羧酸为甲酸