[发明专利]白藜芦醇的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种可用于白藜芦醇抗氧化机制作用的评价方法。

背景技术

衰老的自由基理论认为物质在人体内代谢和产生能量都需要氧参与，但是氧气在代谢过程中会产生各种自由基。

氧自由基是由氧气分子衍生的一系列自由基。自由基是含有一个不成对电子的分子或原子团，如一氧化氮自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基和脂类自由基。由于自由基外层有一个不成对的电子，能量高，非常活跃，容易与其他物质发生反应。低浓度的氧自由基在体内具有重要的生物功能，但伴随氧自由基逐步积累，细胞膜则容易受到其攻击，甚至可能损伤细胞成分导致疾病的发生。由此，无论从心脑血管疾病到癌症，自由基和几种主要疾病特别是衰老和老年退行性疾病(如老年痴呆症和帕金森氏症等)都有密切关系。

白藜芦醇，其英文名：Resveratrol，化学名：E-3,5,4’-三羟基二苯乙烯，其化学结构式是：

白藜芦醇是一种非黄酮类的多酚化合物，其化学结构存在顺式和反式两种异构体，自然界中白藜芦醇主要以反式形式存在，研究表明反式异构体的生理活性强于顺式异构体。白藜芦醇含有三个酚羟基，特别是其中的4-对位羟基是其抗氧化能力的主要来源，其邻二羟基和乙烯基的存在则有助于形成共轭体系，稳定自由基。这样的分子结构使得其具有很强的还原性。白藜芦醇可以通过与自由基反 应，来降低自由基活性，阻止自由基进一步链式反应，达到清除自由基的效果；同时，白藜芦醇能够保持谷胱甘肽的还原状态，从而抑制氧化自由基的生产，最终达到抗氧化的功能。

因此，白藜芦醇能保护细胞和器官免受氧化侵害，阻止胆固醇在血管内的沉淀，免于斑点、皱纹、肌肤松弛的困扰，具有预防肿瘤，心血管疾病，抗衰老和抗菌的生理活性。

尽管白藜芦醇具有抗氧自由基代谢的功能，然而本领域仍然期待有新的有效的抗氧自由基代谢的评价方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的有效的抗氧自由基代谢的评价方法。本发明的另一目的是提供一种对白藜芦醇进行质量检测的方法。已经出人意料地发现，通过本发明，可以使用白藜芦醇有效地评价抗氧自由基代谢。本发明基于此发现而得以完成。

本发明第一方面提供了白藜芦醇在制备评价抗氧自由基代谢的试剂中的用途。

本发明第二方面提供了白藜芦醇评价抗氧自由基代谢的方法。

根据本发明第二方面的方法，该方法包括以下试验项目以评价白藜芦醇抗氧自由基代谢的效果：过氧化氢对大肠杆菌生长的影响、白藜芦醇对大肠杆菌生长的保护作用、发酵罐中的规范实验、氧自由基对大肠杆菌代谢流的影响、高浓度白藜芦醇对大肠杆菌生长的抑制。

进一步的，本发明第三方面提供了一种对白藜芦醇进行质量控制的方法，该方法包括使用高效液相色谱法测定白藜芦醇供试品中白藜芦醇的含量，该方法包括如下操作：

(1)中国药典2015年版四部第59所第0512节所载的高效液相色谱法中的规范进行测定；

(2)色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.05％酒石酸水溶液以体积比30：70为流动相，检测波长为306nm；

取系统适用性试验溶液测定，理论板数按白藜芦醇峰计应不低于3000，白藜芦醇与其最接近的杂质峰之间的分离度应大于1.5，白藜芦醇与白藜芦醇苷峰之间的分离度应大于3.0；

(3)溶液制备：

取白藜芦醇供试品适量，加流动相溶解并稀释，制成每1ml溶液中含有白藜芦醇0.2mg的溶液，过滤，作为供试品溶液(即，200μg/ml)；

精密量取供试品溶液1ml置于100ml量瓶中，用流动相稀释刻度，摇匀，制成含白藜芦醇浓度为2μg/ml的溶液，作为对照溶液(即，2μg/ml)；

精密称取白藜芦醇对照品、白藜芦醇苷对照品适量，用流动相溶解并制成两种物质浓度均为分别为200μg/ml和2μg/ml的溶液，作为系统适用性试验溶液(即，200μg/ml+2μg/ml)；

精密称取白藜芦醇对照品适量，用流动相溶解并制成每1ml溶液中含有白藜芦醇0.2mg的溶液，过滤，作为对照品溶液；

(4)测定：

精密量取对照溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，确定白藜芦醇主成分的保留时间，并读取白藜芦醇峰的峰面积；

精密量取系统适用性试验溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，计算理论板数和各峰之间的分离度；

精密量取对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；