[发明专利]一种用于快速检测华法林个体化用药相关基因CYP2C9和VKORC1多态性的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于快速检测华法林个体化用药相关基因CYP2C9和VKORC1多态性的试剂盒，属于生化检测领域。

背景技术

华法林是一种双香豆衍生物，华法林通过抑制维生素K及其2,3-环氧化物(维生素K环氧化物)的相互转化而发挥抗凝作用。虽为最古老的口服抗凝药物，华法林仍然是目前需要长期抗凝治疗患者的最常用药物。在临床上主要用于防治血栓栓塞性疾病，如治疗血栓栓塞性静脉炎，降低肺栓塞的发病率和死亡率，减少外科大手术，如髄关节固定术、人工置换心脏瓣膜手术等的静脉血栓发生率，以及作为心肌梗塞的辅助用药。但华法林的有效治疗范国较窄且不同个体之间给药剂量存在较大的差异，除了受患者年龄、种族、体重、饮食等临床因素影响外，华法林的靶酶VKORC1和代谢酶CYP2C9的基因遗传多态性是影响华法林用药剂量差异性的主要因素，而当前确定华法林需求剂量时常无法考虑遗传因素的影响，常常造成患者严重的出血并发症。

华法林在体内的代谢主要通过肝脏细胞色素氧化酶P450(CYP)系,华法林含S型和R型2种异构体,S型主要经肝脏CYP2C9代谢，R型由CYP3A4代谢，其中S型华法林的抗凝活性比R型强3～5倍，因此CYP2C9是影响华法林用药剂量的主要酶之一。国外文献报道86％的CYP2C9突变病例仅需要很低的维持剂量(≤1.5mg.d-1)，而需要低维持剂量的普患者为38％，以此具有CYP2C9突变等位基因的个体需要减量给药以较少不良反应的发生。CYP2C9是细胞色素P450酶(CYP)第二亚家族中的重要成员，占肝微粒体P450蛋白总量的20％。CYP2C9参与抗凝血药、抗惊厥药、降糖药、非甾体类解热镇痛抗炎药、抗高血压药以及利尿药等多种药物的羟化代谢，其中华法林、甲苯磺丁脲和苯妥因均为治疗指数较窄的药物。CYP2C9活性变化可导致这些药物体内浓度出现较大变化，甚至导致严重药物不良反应的发生。CYPC2C9*2(rs1799853，C430T，Arg144Cys)和CYP2C9*3(rs1057910，A1075C，Ile359Leu)均导致CYP2C9酶活性降低，CYP2C9*3纯合子个体酶活性仅为该位点野生型纯合子基因型个体(携带CYP2C9*1或Arg144/Ile359等位基因)的4～6％。中国人群中CYPC2C9*2的频率为0％，CYPC2C9*3的频率为3％。CYP2C9*3纯合子华法林需要剂量比野生型纯合子低60％～75％；与野生型比较，CYP2C9*3突变型者的需要剂量明显降低，达到稳态时间延长。在同等剂量时INR值偏高，发生危及生命的严重出血事件的风险增大。因此，用药前进行CYP2C9基因型检测，有助于预测患者的最佳华法林负荷剂量，降低出血事件的发生率。

维生素K氧化还原酶是抗凝药物华法林的作用靶点。维生素K环氧化物还原酶复合物1的编码基因VKORC1的遗传变异可通过影响VKORC1表达，从而影响华法林的敏感性。位于该基因启动子区(-1639G>A)的单核苷酸突变rs9923231可影响VKORC1的表达，是导致华法林用药剂量个体差异的主要原因之一。与该位点AA基因型患者相比，-1639GA和GG基因型患者平均华法林剂量分别增加52％(95％CI：41～64％)和102％(95％CI：85～118％)。VKORC1多态性对华法林剂量影响的比重因种族而异，-1639GA和GG基因型对白种人华法林剂量的影响比对亚洲人的影响分别高10％和50％。总体上，VKORC1多态性在不同种族不同人群中可解释约27％华法林用药剂量的个体差异。VKORC1-1639A等位基因在亚洲人、白种人和黑种人群中的等位基因频率分别为91.17％、38.79％和10.81％(根据千人数据库的结果：在亚洲人、白种人和黑种人群中的等位基因频率分别为92％、40％和7％)，其频率分布的种族差异与华法林用药剂量差异间具有很好的相关性。VKORC多态性同时也影响华法林用药的临床后果。美国FDA于2007年批准修改华法林的产品说明书，推荐在使用华法林前对VKORC1进行基因检测；2010年再次修改说明书，建议结合VKORC1和CYP2C9基因型考虑华法林的初始用药剂量。临床上也可根据考虑了VKORC1和CYP2C9基因型、年龄、身高、体重、种族、是否合用肝药酶诱导剂和是否合用胺碘酮等因素的剂量计算公式确定华法林初始用药剂量。