[发明专利]一种虎杖甙糖苷化的方法

说明书

本发明公开了一种虎杖甙糖苷化的方法，以虎杖甙为底物，在环糊精糖基转移酶和糖基供体的存在下，在pH为5~7、温度为40~70℃的水溶液中搅拌反应，HPLC检测反应进程至产品虎杖甙糖苷不再增加，结束反应，而后进行产品和底物分离的后处理操作，具体的，先除去反应液中多余的糖基供体，再采用萃取法或柱层析法将产品和底物进行分离。采用本发明的方法，解决了虎杖甙糖苷与虎杖甙的分离问题，所制得的虎杖甙糖苷的转化率高，纯度好。

技术领域

本发明属于生物化工领域，具体涉及一种虎杖甙糖苷化的方法。

背景技术

虎杖甙是是多酚类化合物白藜芦醇的单葡萄糖苷，化学名称为3,4’-5-三羟基二苯乙烯 3-O-D-葡萄糖苷，主要来源于花生、葡萄（红葡萄酒）、虎杖、桑椹等植物。虎杖甙是一种生物性很强的天然多酚类物质，是传统中药的有效活性成分，具有抗感染，预防肿瘤，降低血小板聚集，预防和治疗动脉粥样硬化、心脑血管疾病等，具有广泛的应用前景。

虎杖甙在水中溶解度不高，难以被人体吸收，因此在食品、药品和化妆品领域中受到限制。将虎杖甙进行糖苷化后可以较好的解决该问题。目前已经有利用环糊精糖基转移酶进行虎杖甙糖苷化的报道，如Process Biochemistry 47(2012): 528–532，J. Agric.Food Chem. 2012, 60, 8183 – 8189等。目前公开的方法存在转化率低(80%),辅料昂贵（α-环糊精），采用低成本辅料（如淀粉等）转化率低等问题。最为关键的是，目前，由于无法彻底将底物虎杖甙转化完全，目前公开的方法未报到如何进行产品和底物的分离，因此难以放大等问题，难以实用化。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种虎杖甙糖苷化的方法。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：一种虎杖甙糖苷化的方法，以虎杖甙为底物，在环糊精糖基转移酶和糖基供体的存在下，在pH为5~7、温度为40~70℃的水溶液中搅拌反应，HPLC检测反应进程至产品虎杖甙糖苷不再增加，结束反应，而后进行产品和底物分离的后处理操作，具体的，先除去反应液中多余的糖基供体，再采用萃取法或柱层析法将产品和底物进行分离。

优选地，采用萃取法进行产品和底物分离的后处理操作时，其具体过程如下：将大孔树脂Ⅰ通过浓度为95%的乙醇浸泡过夜后湿法装柱，而后用蒸馏水冲洗至无乙醇流出；将反应液过滤、浓缩后上样，采用蒸馏水冲洗至无糖基供体流出，之后再采用浓度为40%的乙醇冲洗至所有产品流出，最后合并产品样品，浓缩并采用等体积的乙酸乙酯进行多次萃取，收集水层、冻干得产品纯品。

进一步优选地，所述的大孔树脂Ⅰ为DM18大孔吸附树脂。

进一步优选地，所述反应过程中所采用的糖基供体为α-环糊精、玉米淀粉或其组合。

优选地，采用柱层析法进行产品和底物分离的后处理操作时，其具体过程如下：在层析柱中装入大孔树脂Ⅱ并用无水乙醇浸泡过夜，依次采用三倍层析柱体积的无水乙醇和去离子水对所述大孔树脂Ⅱ进行冲洗，待用；将反应液进行离心处理，收集液体，并上样，上样后采用去离子水冲洗，最后采用浓度为30%的乙醇溶液进行洗脱，收集洗脱液，HPLC检测分析，合并底物含量小于1%的溶液，将溶剂置换成水，冻干得产品纯品。

进一步优选地，所述的大孔树脂Ⅱ为购自西安蓝晓科技新材料股份有限公司生产的型号为LXT-J420大孔吸附树脂。

进一步优选地，所采用的糖基供体为玉米淀粉。

优选地，反应过程中，所述的环糊精糖基转移酶、糖基供体与虎杖甙的投料质量比为：0.5-1: 60-90:6。