[发明专利]一种提高珍珠番石榴成活率的组织培养方法

权利要求书

1.一种提高珍珠番石榴成活率的组织培养方法，其特征在于，该组织培养方法包括以下步骤：

(1)培养室消毒：培养前12h-14h向关闭门窗的培养室进行灭菌消毒；

(2)外植体的选择：选择珍珠番石榴果树顶芽为外植体，外植体长1cm-2cm，直径0.4cm-0.8cm；

(3)外植体的灭菌：外植体经过水冲洗、75％的酒精浸泡沥干后，在质量浓度为8％-10％的植物处理液中浸泡20min-25min进行灭菌，所述植物处理液的组成及重量百分比为：30％-50％的灵芝提取液、10％-15％的辣蓼草提取液、5％-15％的大蒜提取液、10％-15％的洋葱提取液、5％-10％的藿香提取液、5％-15％的仙人掌提取液、5％-10％的螺旋藻提取液；

(4)初始诱导培养：将灭菌后的外植体接种在诱导培养基中在培养箱中进行诱导培养，培养温度为24℃-26℃，用白色的LED光灯进行光照，光照强度为500Lx-800Lx，光照时间为12h-16h；

(5)继代培养：将步骤(4)中长出新芽的外植体转接入继代培养基中在培养箱中进行继代培养，培养温度为24℃-26℃，用白色的LED光灯进行光照，光照强度为700Lx-1400Lx，光照时间为18h-20h，随着外植体的生长不断更换培养基，继代培养5-7代后将长成生根苗的幼苗转接到放好培养基质的营养杯中进行培养；

(6)炼苗：将营养杯中的珍珠番石榴幼苗放在大棚中进行炼苗，炼苗温度为22℃-26℃，光照为日光照射；

所述步骤(4)的诱导培养基组成为：COD含量为300mg/L-800mg/L的15％-20％木薯酒精废液，2g/L-5g/L的蔗糖，3g/L-5g/L的灵芝提取液，8g/L-10g/L的螺旋藻提取液，2g/L-4g/L的辣蓼草提取液，4.0g/L-7.0g/L的琼脂，0.3mg/L-0.6mg/L的萘乙酸；

所述步骤(5)的继代培养基组成为：COD含量为500mg/L-1000mg/L的15-20％木薯酒精废液，5g/L-8g/L的蔗糖，3g/L-5g/L的灵芝提取液，2g/L-5g/L的螺旋藻提取液，2g/L-4g/L的辣蓼草提取液，6.0g/L-10.0g/L的琼脂。

2.根据权利要求1所述的一种提高珍珠番石榴成活率的组织培养方法，其特征在于，所述步骤(2)的外植体选用本地番石榴与良种珍珠番石榴的2-3年嫁接苗。

3.根据权利要求1所述的一种提高珍珠番石榴成活率的组织培养方法，其特征在于，所述步骤(5)营养杯中的培养基质的质量百分比组成为：40％-60％的米糠、20％-30％的稻杆，10％-20％的红土，5％-10％的有机肥。

4.根据权利要求1所述的一种提高珍珠番石榴成活率的组织培养方法，其特征在于，所述提取液的提取方法采用索氏提取器回流提取法。