[发明专利]一种提高珍珠番石榴成活率的组织培养方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及植物组织培养领域，特别涉及一种提高珍珠番石榴成活率的组织培养方法。

【背景技术】

番石榴是桃金娘科番石榴属植物，原产热带美洲，现在很多热带、亚热带地区广为栽培，在我国主要分布于海南、广西、广东、福建和台湾等地，珍珠番石榴果树的生长对环境的要求很严格，现行番石榴果树的育苗方法多为嫁接培养，嫁接培养周期通常为1-2年才能获得珍珠番石榴幼苗，嫁接培养的培养周期长，而且培养方法复杂，目前，也有一些学者开始研究珍珠番石榴果树的组织培养方法，但是珍珠番石榴果树外植体容易染菌，造成褐化，对灭菌剂敏感，因此根据常规方法培养培养珍珠番石榴不容易成活。

目前，在进行植物的组织培养过程中，我国常用的灭菌消毒剂主要以升汞为主,国内外对汞的毒性作用进行了大量的研究,证实汞对细胞的每一生长过程都有重要影响,所以经过升汞灭菌的外植体,需彻底除去残留的Hg+,以消除微量的残留升汞对外植体的伤害，珍珠番石榴果树外植体不容易进行组织培养繁殖，因此，在珍珠番石榴组织培养过程中有必要提供一种理想的组织培养方法，不仅能应用与珍珠番石榴的多种外植体，还能有效的对外植体表面进行消毒，还不会对外植体进行侵害，同时还能有效降低生产成本。

【发明内容】

鉴于上述内容，有必要提供一种理想的组织培养方法，不仅能应用与珍珠番石榴的多种外植体，还能有效的对外植体表面进行消毒，还不会对外植体进行侵害，同时还能有效降低生产成本。

为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：

一种提高珍珠番石榴成活率的组织培养方法，该组织培养方法包括以下步骤：

(1)培养室消毒：培养前12h-14h向关闭门窗的培养室进行灭菌消毒；

(2)外植体的选择：选择珍珠番石榴果树顶芽为外植体，外植体长1cm-2cm，直径0.4cm-0.8cm；

(3)外植体的灭菌：外植体经过水冲洗、75％的酒精浸泡沥干后，在质量浓度为8％-10％的植物处理液中浸泡20min-25min进行灭菌，所述植物处理液的组成及重量百分比为：30％-50％的灵芝提取液、10％-15％的辣蓼草提取液、5％-15％的大蒜提取液、10％-15％的洋葱提取液、5％-10％的藿香提取液、5％-15％的仙人掌提取液、5％-10％的螺旋藻提取液；

(4)初始诱导培养：将灭菌后的外植体接种在诱导培养基中在培养箱中进行诱导培养，培养温度为24℃-26℃，用白色的LED光灯进行光照，光照强度为500Lx-800Lx，光照时间为12h-16h；

(5)继代培养：将步骤(4)中长出新芽的外植体转接入继代培养基中在培养箱中进行继代培养，培养温度为24℃-26℃，用白色的LED光灯进行光照，光照强度为700Lx-1400Lx，光照时间为18h-20h，随着外植体的生长不断更换培养基，继代培养5-7代后将长成生根苗的幼苗转接到放好培养基质的营养杯中进行培养；

(6)炼苗：将营养杯中的珍珠番石榴幼苗放在大棚中进行炼苗，炼苗温度为22℃-26℃，光照为日光照射。

进一步的，所述外植体选用本地番石榴与良种珍珠番石榴的2-3年嫁接苗。

进一步的，所述诱导培养基组成为：COD含量为300mg/L-800mg/L的15％-20％木薯酒精废液，2g/L-5g/L的蔗糖，3g/L-5g/L的灵芝提取液，8g/L-10g/L的螺旋藻提取液，2g/L-4g/L的辣蓼草提取液，4.0g/L-7.0g/L的琼脂，0.3mg/L-0.6mg/L的萘乙酸。

进一步的，所述继代培养基组成为：COD含量为500mg/L-1000mg/L的15-20％木薯酒精废液，5g/L-8g/L的蔗糖，3g/L-5g/L的灵芝提取液，2g/L-5g/L的螺旋藻提取液，2g/L-4g/L的辣蓼草提取液，6.0g/L-10.0g/L的琼脂。

进一步的，所述营养杯基质的重量百分比组成为：40％-60％的米糠、20％-30％的稻杆，10％-20％的红土，5％-10％的有机肥。

进一步的，所述提取液的提取方法采用索氏提取器回流提取法。

本发明具有如下有益效果：