[发明专利]一种帕布昔利布原料有关物质的检测方法

权利要求书

1.一种帕布昔利布原料中的有关物质的检测方法，其中所述帕布昔利布原料中的有关物质包括8-环戊基-5-甲基-2-（5-哌嗪-1-基 - 吡啶-2-基氨基）-8H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮、8-环戊基-5-甲基-2 - （（5-（哌嗪-1-基）吡啶-2-基）氨基）-6-乙烯基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7（8H） - 酮、4- [6-（6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-7-氧代-7,8-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基氨基）-吡啶-3-基] - 哌嗪-1-羧酸叔丁基酯一种或多种，该方法是采用高效液相色谱法进行的，包括下述步骤：

（1）配制帕布昔利布样品溶液，所述帕布昔利布样品溶液包括供试品溶液；

（2）将步骤（1）所得样品溶液注入高效液相色谱仪，采用流动相A 和流动相B 作为流动相进行梯度洗脱，并记录色谱图；

其中，所述供试品溶液的制备方法包括下述步骤：精密称取帕布昔利布原料样品，加稀释液溶解并稀释至帕布昔利布的浓度为0.2mg/ml～2.0mg/ml，得到供试品溶液；

所述高效液相色谱法的色谱柱固定相填充剂为氟苯基键合硅胶或苯基键合硅胶，

流动相A为0.05%的酸溶液；流动相B为甲醇；

其中所述高效液相色谱法的梯度洗脱顺序如下：

0 分钟时流动相为：90～100 体积% 流动相A+0～10 体积% 流动相B ；

0-30分钟时流动相为：45～55 体积% 流动相A+45～55 体积% 流动相B ；

30-45分钟时流动相为：0～10 体积% 流动相A+90～100 体积% 流动相B ；

45-55分钟时流动相为：90～100 体积% 流动相A+0～10 体积% 流动相B。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的色谱柱固定相填充剂为氟苯基键合硅胶。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其中，

所述高效液相色谱法的梯度洗脱顺序如下：

0分钟时流动相为：97 体积% 流动相A+3 体积% 流动相B ；

0-30分钟时流动相为：50 体积% 流动相A+50 体积% 流动相B ；

30-45分钟时流动相为：3 体积% 流动相A+97 体积% 流动相B ；

45- 55分钟时流动相为：97 体积% 流动相A+3 体积% 流动相B。

4.根据权利要求1 至3 中任一项所述的检测方法，其中所述的酸溶液的酸为高氯酸、磷酸或三氟乙酸；

酸溶液的pH为2.0~7.0； 流动相的流速为0.3～0.5ml/min。

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述的流动相的pH为2.3。

6.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述的酸溶液的酸为高氯酸；流动相的流速为0.4ml/min。

7.根据权利要求1至3中任一项所述的检测方法， 其中所述高效液相色谱法的色谱柱柱温为40～65℃；

自动进样室温度为4~30℃；

检测波长为220nm。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，其中所述高效液相色谱法的色谱柱柱温为55℃ ；

自动进样室温度为25℃。