[发明专利]一种帕布昔利布原料有关物质的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于药物分析领域。具体的说，本发明涉及一种采用高效液相色谱法测定帕布昔利布原料有关物质的检测方法。

技术背景

帕布昔利布（Palbociclib）是由美国辉瑞制药有限公司研发的一种高选择性的细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4和CDK6可逆性拮抗剂。其化学名为6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2-{[5-（1-哌嗪基）-2-吡啶基]氨基}-7，8-二氢喹唑啉-7-酮，英文化学名为6-acetyl-8-cyclopentyl-5-methyl-2 - {[5- (1-piperazinyl) -2-pyridinyl] amino} -7,8-dihydro-quinazolin-7 ketone，其分子量为447.53，分子式为C₂₄H₂₉N₇O₂。

帕布昔利布可通过抑制CDK4/6阻断细胞周期从G1期到S期的进程，从而抑制DNA合成。临床前研究数据表明，Palbociclib具有肿瘤细胞减灭作用及抑制细胞生长作用，是2015年由FDA批准的目前上市的第一个乳腺癌免疫治疗药物，目前上述的为普通胶囊剂（规格75mg、100mg和125mg）。

乳腺癌是乳房腺上皮细胞在多种致癌因子作用下，发生基因突变，致使正常细胞变为癌细胞。癌细胞的恶性增值使得乳腺组织的正常结构被破坏，挤压并侵蚀正常组织。乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一（男性少见但存在），仅次于子宫癌，其也可扩散到其他部位，也是严重危害患者身心健康、增加社会医疗负担的重大疾病。

乳腺癌的早期治疗包括手术治疗、内分泌治疗、化疗、放疗及分子靶向治疗，尽管如此，仍有很多患者会发生转移和复发，其主要机制包括肿瘤耐药、信号通路的激活和癌基因的活化等。目前，较多研究关注于肿瘤微环境和宿主的关系，其中免疫系统是重要的组成部分之一。因此针对患者的免疫系统，通过调节其在肿瘤为缓解以及宿主中的作用成为乳腺癌后续治疗的依据。帕布昔利布通过抑制CDK4/6阻断细胞周期从G1期到S期的进程，从而抑制DNA的合成。其临床前试验数据表明帕布昔利布具有肿瘤细胞减灭作用及抑制细胞生长作用。

目前帕布昔利布原料合成工艺中，最终原料产品中可能含有的起始原料、中间体及降解的已知杂质共有7个，分别为4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯（SM1）、6-溴-2-氯-8-环戊基-5-甲基-吡啶并[2,3-D]嘧啶-7(8H)-酮（SM2）、叔丁基4-（6-（6-溴-8-环戊基-5-甲基-7-氧-7,8-二氢吡啶[2,3-d]嘧啶-2-yl氨基）吡啶-3-yl）哌嗪-1-羧酸盐（PALB01）、叔丁基4-（6-（6-（1-丁氧基乙烯）-8-环戊基-5-甲基-7-氧-7,8-二氢吡啶[2,3-d]嘧啶-2-yl氨基）吡啶-3-yl）哌嗪-1-羧酸盐（PALB02）、8-环戊基-5-甲基-2 - （（5-（哌嗪-1-基）吡啶-2-基）氨基）-6-乙烯基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7（8H） - 酮（PF-06651464）、8-环戊基-5-甲基-2-（5-哌嗪-1-基 - 吡啶-2-基氨基）-8H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮（PF-00447880）、4- [6-（6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-7-氧代-7,8-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基氨基）-吡啶-3-基] - 哌嗪-1-羧酸叔丁基酯（PF-00310864）。

本发明所涉及的一种帕布昔利布原料有关物质的检测方法主要是针对以上其中帕布昔利布已知杂质进行有效的检测和分离。其中，4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯、6-溴-2-氯-8-环戊基-5-甲基-吡啶并[2,3-D]嘧啶-7(8H)-酮为起始原料；叔丁基4-（6-（6-溴-8-环戊基-5-甲基-7-氧-7,8-二氢吡啶[2,3-d]嘧啶-2-yl氨基）吡啶-3-yl）哌嗪-1-羧酸盐、叔丁基4-（6-（6-（1-丁氧基乙烯）-8-环戊基-5-甲基-7-氧-7,8-二氢吡啶[2,3-d]嘧啶-2-yl氨基）吡啶-3-yl）哌嗪-1-羧酸盐为合成中间体；8-环戊基-5-甲基-2 - （（5-（哌嗪-1-基）吡啶-2-基）氨基）-6-乙烯基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7（8H） - 酮、8-环戊基-5-甲基-2-（5-哌嗪-1-基 - 吡啶-2-基氨基）-8H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮、4- [6-（6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-7-氧代-7,8-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基氨基）-吡啶-3-基] - 哌嗪-1-羧酸叔丁基酯为降解产物。