[发明专利]含有GLP‑1类似物融合蛋白的稳定液体制剂及其制备

说明书

技术领域

本发明涉及一种GLP-1类似物融合蛋白的稳定液体制剂及其制备方法，该制剂用于治疗糖尿病及相关的多种疾病的治疗。

背景技术

胰高血糖素样肽-1(GLP-1)及其类似物例如Exendin-4被广泛应用于2型糖尿病的治疗研究，但是由于胰高血糖素样肽-1(GLP-1)及其类似物对蛋白酶二肽基肽酶Ⅳ(DPP-IV)的敏感性，导致其在血浆中的半衰期很短，从而造成给药频率过高，给临床应用带来不便。目前解决上述问题的技术手段主要包括缓释微球、PEG修饰、脂肪酸链修饰、白蛋白融合等，其中人白蛋白融合技术使用较多，此技术在保持目的蛋白的生物学活性和治疗功能的同时，提高其在体内半衰期。

目前在国内已有多种改造后的GLP-1类似药物上市，但是改造后的GLP-1制剂生物学活性下降，导致临床剂量的大幅增加，增加潜在的免疫原性风险。限于注射给药容量问题，剂量增大势必导致药物制剂浓度的增高，高浓度的蛋白制剂在运输和贮存期间容易造成蛋白质聚体增加。已有的研究表明，治疗用蛋白聚体增加，会增加免疫原性(Anne S.De Grootand David W.Scott,Trends Immunol Vol.28No.11:482-490)。重组蛋白多聚体会通过交联B细胞受体，激活B细胞增生从而启动B细胞和T细胞免疫。而且，重组蛋白多聚体也更容易被抗原递呈细胞(APC)所吞噬，从而加快驱使树突细胞(dendritic cell,DC)的成熟从而激发多种免疫反应。

另外蛋白质药物易降解易失活，不易长期保存。通常采用冻干粉针剂的方法来保存蛋白质药物，以延长保质期。但是，冻干粉针剂在使用前必须先溶解，病人自行使用不方便，甚至会出现安全性问题。针对上述问题，本发明提供一种GLP-1类似物融合蛋白的稳定液体制剂及其制备方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种GLP-1类似物融合蛋白的稳定液体制剂及其制备方法。

本发明所述制剂包含有效成分GLP-1类似物融合蛋白，药用缓冲剂，渗透压调节剂，保护剂，表面活性剂，辛酸钠等；

为了维持GLP-1类似物融合蛋白稳定性和活性，本发明所述制剂包含药用缓冲剂，调节pH在5.0-7.4之间，优选pH在6.0-7.0之间，更优选pH在6.4-7.0之间。所述缓冲剂包含但不仅限于柠檬酸/Na₂HPO₄混合物、醋酸盐混合物、N a₂HPO₄/NaH₂PO₄混合物、Tris盐酸、组氨酸/组氨酸盐酸混合物。药用缓冲剂的浓度优选为15-50μmol/ml，再优选为15-40μmol/ml，更优选为20-30μmol/ml。本发明优选药用缓冲剂为柠檬酸/Na₂HPO₄混合物、醋酸盐混合物、Na₂HPO₄/NaH₂PO₄混合物，再优选为柠檬酸/Na₂HPO₄混合物、Na₂HPO₄/NaH₂PO₄混合物，更优选为Na₂HPO₄/NaH₂PO₄混合物。

为了满足GLP-1类似物融合蛋白在治疗时的等渗状态，本发明所述制剂包含渗透压调节剂，渗透压调节剂是生理耐受性化合物，可赋予制剂合适的张力以阻止穿过细胞膜的净水流。这类化合物包含NaCl，甘露醇，蔗糖，海藻糖和木糖醇等。渗透压调节剂优选浓度为10-80mg/ml，再优选浓度为20-60mg/ml，更优选浓度为30-45mg/ml。渗透压调节剂的优选为甘露醇、海藻糖或木糖醇，更优选的渗透压调节剂是甘露醇。

为了防止GLP-1类似物融合蛋白降解，增加其稳定性，本制剂加入一些氨基酸作为保护剂，所述氨基酸选自但不仅限于甘氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、苏氨酸、赖氨酸、精氨酸、脯氨酸、异亮氨酸、组氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、色氨酸、谷氨酸和天冬氨酸等。优选氨基酸为甘氨酸、组氨酸、丙氨酸、苏氨酸、 脯氨酸和蛋氨酸，更优选为甘氨酸、组氨酸和蛋氨酸。保护剂优选浓度为2-50mg/ml，再优选浓度为5-30mg/ml，更优选浓度为10-15mg/ml。