[发明专利]一种农杆菌介导的寡雄腐霉遗传转化方法有效
| 申请号： | 201610637478.4 | 申请日： | 2016-08-05 |
| 公开（公告）号： | CN106282222B | 公开（公告）日： | 2018-03-20 |
| 发明（设计）人： | 王沛雅;周剑平;杨晖;祝英;彭轶楠;巩晓芳;王治业 | 申请（专利权）人： | 周剑平;杨晖;王沛雅 |
| 主分类号： | C12N15/80 | 分类号： | C12N15/80;C12R1/645 |
| 代理公司： | 兰州振华专利代理有限责任公司62102 | 代理人： | 张晋 |
| 地址： | 730000 甘肃*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 杆菌 寡雄腐霉 遗传 转化 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种农杆菌介导的寡雄腐霉遗传转化方法，其特征在于包括如下步骤：
(1) 寡雄腐霉悬浮液制备：用诱导培养基IM冲洗平板上的寡雄腐霉孢子及部分菌丝，使寡雄腐霉孢子菌丝悬浮液的浓度为1×106～7个/mL；
(2) 包含目的基因载体的农杆菌菌液制备：挑取农杆菌单克隆活化扩大培养后，收集菌体用诱导培养基IM重悬稀释菌体至浓度OD600为0.3～0.7；
(3) 农杆菌菌液侵染寡雄腐霉悬浮液：将上述农杆菌菌液与寡雄腐霉悬浮液混合共培养，农杆菌菌液与寡雄腐霉悬浮液比例为1～10 ：1，培养条件为避光，25℃, 60rmp，培养时间24h～96h；
(4) 恢复培养：向共培养后的菌液中加入细菌抗生素， 26℃，120rmp，培养24～48h；
(5) 转化子筛选：离心收集恢复培养后的菌体，用PDB重悬，涂布添加有抗性选择压的PDA平板，26℃培养；挑取抗性单菌落接种于抗性选择压PDA平板26℃培养至菌丝生长铺满平板，收集菌体用于阳性检测；
步骤（1）和（2）所述的诱导培养基IM为：PDB+300 μ M 乙酰丁香酮，pH值为5.0。
2.根据权利要求1所述的遗传转化方法，其特征在于步骤(2)所述的农杆菌浓度OD600为0.6。
3.根据权利要求1所述的遗传转化方法，其特征在于步骤(3)所述的培养时间为48-96h。
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