[发明专利]1‑天冬缀‑3‑雌醇,其制备,纳米结构,抗骨质疏松活性和应用

说明书

技术领域

本发明涉及1分子天冬氨酸缀合3分子雌二醇的化合物(简称1-天冬缀-3-雌醇)，涉及它的制备方法，涉及它的纳米结构，进一步涉及它在化学阉割的雌性小鼠骨质疏松模型上的抗骨质疏松作用。因而本发明公开了它在制备抗骨质疏松药物中的应用前景。本发明属于生物医药领域。

背景技术

骨质疏松症是一种以低骨量和骨组织微结构破坏为特征，导致骨骼脆性增加和易发生骨折的全身性疾病。药源性骨质疏松症在临床普遍出现在服用糖皮质激素的患者。糖皮质激素，例如可的松、氢化可的松和地塞米松，是临床抗炎和免疫抑制的一线药物。虽然糖皮质激素有很好的抗炎和免疫抑制作用，但是它们引起骨质疏松症的副作用严重限制了它们的临床应用。虽然普遍使用的抗骨质疏松药物可以拮抗糖皮质激素引起的骨质疏松症，但是抗骨质疏松症药物都存在子宫内膜增生和凝血两种副反应。这种状态使得发明拮抗糖皮质激素的骨质疏松症副作用的新型抗骨质疏松药物，一直是药物研究的兴趣之一。不过，始终没有找到实质性解决办法。例如2006年美国公开的一项专利(US 7067505B2)虽然涉及了一个天冬氨酸的主链和侧链羧基连接两个雌二醇的化合物(简称1-天冬缀2-雌醇)的合成方法，但是没有评价它的活性和副作用。2000年发明人就开始研究雌二醇的结构修饰，发现用天冬氨酸连接雌二醇的关键技术有两点。一点是天冬氨酸连接的雌二醇的数不得小于3，才能增强抗骨质疏松活性。另一点是天冬氨酸的两个羧基和一个氨基都不能裸露或者天冬氨酸数不少于2，才能保证消除雌二醇的凝血和子宫内膜增生两个副作用。为了确认US 7067505B2的1-天冬缀2-雌醇的疗效缺陷，发明人特地合成了1-天冬缀2-雌醇并在手术摘除卵巢的去势模型和泼尼松诱导的化学阉割两个骨质疏松模型上评价了抗骨质疏松活性和副作用的改善状况。结果表明，同剂量下1-天冬缀2-雌醇的抗骨质疏松活性与雌二醇相当，与雌二醇一样1-天冬缀2-雌醇也引起子宫内膜增生和凝血。

发明人按照用天冬氨酸连接雌二醇的两个关键技术，将天冬氨酸的两个羧基和一个氨基都与雌二醇缀合，同时实现了天冬氨酸连接的雌二醇的数不小于3以及天冬氨酸的两个羧基和一个氨基都不裸露的要求。发明人发现，生成的雌二醇全缀合的天冬氨酸确实不仅可以完全拮抗糖皮质激素引起的骨质疏松症，还不会引起子宫内膜增生和凝血两种副反应。因此是理想的新型抗骨质疏松剂。根据这个发现，发明人提出了本发明。本发明的化合物的突出创造性是,1)在保留雌二醇抗骨质疏松作用的前提下消除了雌二醇子宫内膜增生和血栓形成副作用；2)形成的纳米球的尺寸有利于体内输送。

发明内容

本发明的第一个内容是提供下式的1分子天冬氨酸缀合3分子雌二醇的化合物(简称1-天冬缀-3-雌醇)。

本发明的第二个内容是提供1-天冬缀-3-雌醇的制备方法，包括以下步骤:

1)丙酮为溶剂，加入K₂CO₃，雌二醇与溴乙酸乙酯65℃回流，得到雌二醇-3-亚甲基乙酯；

2)雌二醇-3-亚甲基乙酯用氢氧化钠水解为雌二醇-3-亚甲基甲酸；

3)四氢呋喃为溶剂，在DCC和HOBt存在下Boc-Asp与两分子雌二醇酯化，得到Boc-Asp(雌二醇)-雌二醇；

4)Boc-Asp(雌二醇)-雌二醇用氯化氢的乙酸乙酯溶液脱除Boc，得到HCl·Asp(雌二醇)-雌二醇；

5)以DMF为溶剂，在EDC和HOBt存在下将雌二醇-3-亚甲基甲酸和HCl·Asp(雌二醇)-雌二醇缩合得到1-天冬缀-3雌醇。

本发明的第三个内容的是测定1-天冬缀-3-雌醇的抗骨质疏松活性。

本发明的第四个内容的是测定1-天冬缀-3-雌醇的纳米结构。

附图说明

图1 1-天冬缀-3雌醇的合成路线图。i)溴乙酸乙酯,K₂CO₃,丙酮,回流,65℃；ii)2N NaOH；iii)Boc-Asp,HOBt,DCC,THF,NMM；iv)氯化氢/乙酸乙酯(4M)；v)HOBt,EDC,DMF,NMM。

图2 1-天冬缀-3雌醇的透射电镜照片。

图3 1-天冬缀-3雌醇连续7天的平均粒径。

图4 1-天冬缀-3雌醇连续7天的Zeta电位。

具体实施方式