[发明专利]携带人C基因型乙型肝炎病毒的表面抗原S基因的重组腺相关病毒载体及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种携带人C基因型乙型肝炎病毒表面抗原S基因的重组腺相关病毒载体,其特征是：将人C基因型的乙型肝炎病毒的表面抗原S基因，简写为HBV-C S基因，插入已剔除腺相关病毒结构基因Rep和Cap并带有启动子的rAAV载体中，构建成为携带HBV-C S基因的重组腺相关病毒载体，命名为AAV/HBV-C S；其中在所述腺相关病毒两端的TR的第75位核苷酸序列处还均插入由9个核苷酸组成的序列片段：CGGCGCTGG；所述AAV/HBV-C S能够激发HBV C基因的抗原特异性CTL反应，且所述AAV/HBV-C S感染的DC所诱导的CTL靶向HBV-C HbsAg抗原阳性细胞的杀伤率为50％-60％，其中所述HBV-C HbsAg抗原阳性细胞为受C型HBV感染的细胞；

所述rAAV载体中启动子为AAV的p5启动子AAV p5、巨噬细胞病毒启动子CMVp、猴空泡病毒40启动子SV40p和beta肌动蛋白启动子β-actinp中的任意一个。

2.根据权利要求1所述的重组腺相关病毒载体，其特征在于：为以下中之一种：

携带AAV p5启动子及HBV-C S基因的重组腺相关病毒载体，命名为AAV/p5/HBV-C S；

携带CMVp启动子及HBV-C S基因的重组腺相关病毒载体，命名为AAV/CMVp/HBV-C S；

携带SV40p启动子及HBV-C S基因的重组腺相关病毒载体，命名为AAV/SV40p/HBV-C S；和

携带β-actinp启动子及HBV-C S基因的重组腺相关病毒载体，命名为AAV/β-actinp/HBV-C S。

3.构建权利要求1或2所述重组腺相关病毒载体的方法，首先获得HBV-C S基因，然后将该基因插入所述rAAV载体中，得到携带HBV-C S基因的重组腺相关病毒载体AAV/HBV-C S。

4.与权利要求1或2所述或权利要求3所述方法制备得到的重组腺相关病毒载体相关的产品，包括携带HBV-C S基因的重组腺相关病毒载体质粒AAV/HBV-C S质粒、携带HBV-C S基因的重组腺相关病毒AAV/HBV-C S病毒或被携带HBV-C S基因的重组腺相关病毒感染或转染的单核细胞-树突状细胞系。

5.权利要求4所述重组腺相关病毒载体相关的产品的制备方法，分别为：

AAV/HBV-C S质粒的制备：在权利要求3所述方法后增加步骤：将连接后的DNA－AAV/HBV-C S导入基因工程大肠杆菌DH5α感受态细胞，用含氨苄青霉素的LB平板进行抗性筛选，挑取白色单菌落，提取质粒并纯化，得到重组腺相关病毒载体质粒，命名为AAV/HBV-C S质粒；

AAV/HBV-C S病毒的制备：以所述AAV/HBV-C S质粒和pHelper质粒共转染AAV-HEK293细胞得到重组腺相关病毒，命名为AAV/HBV-C S病毒；

携带HBV-C S基因的重组腺相关病毒感染或转染的细胞系的制备：用所述AAV/HBV-C S病毒分别或依次感染或转染单核细胞-树突状细胞系。

6.权利要求1或2所述重组腺相关病毒载体AAV/HBV-C S或权利要求3方法制备得到的重组腺相关病毒载体AAV/HBV-C S在制备抗C基因型HBV感染药物中的应用。

7.权利要求4所述重组腺相关病毒载体相关的产品或权利要求5方法制备得到的AAV/HBV-C S质粒、AAV/HBV-C S病毒、被AAV/HBV-C S分别或依次感染或转染得到的单核细胞-树突状细胞系在制备抗C基因型HBV感染药物中的应用。

8.一种抗C基因型HBV感染的细胞免疫治疗的药物，其活性成分为权利要求1或2所述的重组腺相关病毒载体AAV/HBV-C S或权利要求4所述重组腺相关病毒载体相关的产品，包括AAV/HBV-C S质粒、AAV/HBV-C S病毒、被AAV/HBV-C S病毒感染或转染得到的单核细胞-树突状细胞。