[发明专利]携带人C基因型乙型肝炎病毒的表面抗原S基因的重组腺相关病毒载体及其构建方法与应用

说明书

本发明公开了一种携带人C基因型乙型肝炎病毒的表面抗原S基因的重组腺相关病毒载体及其构建方法与其应用。是将人C基因型乙型肝炎病毒的表面抗原基因(HBV‑C S基因)插入已经剔除结构基因并带有启动子的腺相关病毒载体中获得的。该重组腺相关病毒载体可将其携带的HBV‑C S基因输送入单核细胞‑树突状细胞系中，被用于刺激免疫系统的效应细胞，从而杀灭被HBV‑C病毒感染的细胞，可被用于制备抗HBV‑C病毒感染的药物。

技术领域

本发明涉及生物制药领域，特别是涉及一种携带人C基因型乙型肝炎病毒的表面抗原(Hepatitis B virus surface antigen，HBsAg)基因(S基因)的重组腺相关病毒载体(rAAV)及其构建方法与其在制备抗人C基因型乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)感染性疾病的细胞免疫治疗药物中的应用。

背景技术

目前，全球约有3.5亿人患有慢性乙型病毒性肝炎(简称“乙肝”)，仅在中国，每年约有50多万人死于慢性乙型肝炎导致的肝脏损害和肝癌，每年因慢性乙肝(包括肝硬化、肝癌)直接经济损失约9000亿人民币。乙肝的治疗现状尚不能令人满意。对大多数慢性乙肝患者的治疗主要以护肝降酶药物为主，这类药物并无抗病毒作用，只是辅助药物。核苷类药物抑制乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus，HBV)复制的作用很强，故能很快缓解肝脏炎症，多数病人在数月内肝功能试验就能正常。但这类药物停药后大多数病人将复发，而且停药复发在少数病人可能导致灾难性的后果。干扰素治疗慢性乙肝能够持续抑制HBV复制，使炎症持续缓解，复发较少，抗病毒效果相当稳定。但达到这种治疗效果的患者较少，其疗效仍不理想。

目前，抗乙肝药物疗效不理想的主要原因之一是由于HBV DNA与患者的细胞染色体DNA整合，药物无法清除整合的HBV DNA。因此，为达到彻底清除HBV，达到治愈乙肝的目的，必须清除存在于细胞中的HBV。为达到该目的，彻底清除受HBV感染的细胞是最主要的手段。细胞免疫反应的效应细胞，即细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocytes，CTL)可发挥这种作用。树突状细胞(Dedritic Cells，DC)是人体最重要、也是最主要的抗原提呈细胞。大量的研究已经证明无论在体内还是体外，DC细胞均可诱导或刺激产生具有抗病毒感染的细胞免疫反应，是靶向性细胞免疫治疗的最主要的技术之一。

1984年，美国Paul L.Hermonat证明AAV载体可用于人类疾病的基因治疗(Hermonat,P.L.,and Muzyczka,N.Use of adeno-associated virus as a mammalianDNA cloning vector:transduction of neomycin resistance into mammalian tissueculture cells.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.81:6466-6470.)。可将携带治疗基因的AAV病毒注入患者体内，使其在体内表达治疗基因，从而达到治疗疾病的目的。2012年11月2日欧盟批准UniQure公司的Glybera产品在欧盟27个成员国使用，它是利用腺相关病毒I型(AAV-1)携带外源基因用于治疗脂蛋白脂酶缺乏遗传病(LPLD)的基因药物。