[发明专利]一种虫草类药材样品中两种微量核苷的检测方法

权利要求书

1.一种在线固相萃取-HPLC法分析虫草类样品中3’-脱氧腺苷和2’-脱氧腺苷的分析方法，包括以下测定步骤：

a、供试品溶液的制备：准确称取样品粉末适量，置于离心管中，加入适量超纯水，混匀，超声提取，摇匀，离心，取上清液过膜，即得供试品溶液；

b、混合对照品溶液的制备：精密称取3’-脱氧腺苷和2’-脱氧腺苷对照品适量，用100mL容量瓶定容，得浓度为201.4μg/mL的3’-脱氧腺苷和198.5μg/mL的2’-脱氧腺苷混合对照品溶液；

c、在线固相萃取-HPLC测定：检测装置包括固相萃取柱、分析柱、六通阀、废液收集器和检测器；其中固相萃取柱为ZORBAX SB-AQ柱，柱长为12.5mm，内径为4.6mm，填料粒直径为5μm；分析柱为ZORBAX SB-AQ柱，柱长为150mm，内径为4.6mm，填料粒直径为5μm；混合对照品溶液和供试品溶液检测器类型为紫外检测器；检测条件为：流速为1mL/min，柱温为40℃，进样量为40μL，检测波长：260nm；检测方法为：样品进样后经过固相萃取柱净化富集，首先采用9％甲醇水溶液冲洗3min，除去杂质，3min时由废液流路切换至分析流路，3-5min时流动相逐渐转化为0.1％甲酸水-甲醇溶液，其体积比为91:9，继续洗脱12min；

d、混合对照品分别进样1μL、5μL、10μL、20μL、30μL和40μL，供试品进样40μL，分别测定峰面积，根据混合对照品峰面积与浓度制作对照品3’-脱氧腺苷和2’-脱氧腺苷的标准曲线，计算线性方程和相关系数；

e、根据所得的供试品峰面积和步骤d线性方程计算供试品中3’-脱氧腺苷和2’-脱氧腺苷的含量。

2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备方法为：准确称取样品粉末1.0g，置于5mL离心管中，加入4mL的超纯水，混匀，超声提取30min，超声频率40kHz，超声功率500w，摇匀，离心5min，转速为12000rpm，取上清液，经0.22μm水系滤膜，即得供试品溶液。

3.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述混合对照品溶液的制备方法为：精密称取20.14mg的3’-脱氧腺苷对照品置于100mL容量瓶中，用超纯水溶解并定容至刻度，得浓度为201.4μg/mL的3’-脱氧腺苷对照品溶液；精密称取19.85mg的2’-脱氧腺苷对照品置于100mL容量瓶中，用超纯水溶解并定容至刻度，得浓度为198.5μg/mL的2’-脱氧腺苷对照品溶液；准确量取两对照品溶液1mL，置于100mL容量瓶中用超纯水定容至刻度，得混合对照品溶液。

4.根据权利要求1所述的分析方法，在线固相萃取-HPLC测定的检测装置包括固相萃取柱、六通阀、废液收集器、分析柱和检测器；检测装置安装方式为：废液流路为固相萃取柱、六通阀1-6流路与废液收集器联通；分析流路为固相萃取柱、六通阀1-2流路、分析柱、检测器和废液收集器联通。

5.根据权利要求1-4任一项所述的分析方法，其特征在于，所述的虫草类样品包括冬虫夏草，中国被毛孢菌丝体，蝉花和蛹虫草。