[发明专利]裂解液、提取液、裂解和提取方法、试剂盒及应用、PCR体系

权利要求书

1.一种双组分型鱼类组织DNA提取液，其特征在于，包括作为第一组分的裂解液和作为第二组分的中和液，

所述裂解液由以下组分组成：

乙二胺四乙酸和/或乙二胺四乙酸钠盐、氯化钠、十二烷基硫酸钠、强碱以及水，

其中相对于裂解液而言，乙二胺四乙酸和/或乙二胺四乙酸钠盐的摩尔浓度为2～10mM，氯化钠的摩尔浓度为1～10mM，十二烷基硫酸钠的质量分数为0.1～10％，并且强碱的氢氧根离子的摩尔浓度为100～300mM；

所述中和液包括：含有吐温-20的pH值为6.4～7.4的Tris-HCl缓冲液，其中所述中和液中的吐温-20的质量分数为0.02％～0.1％，所述中和液中的Tris的摩尔浓度为0.2～1mM。

2.根据权利要求1所述的双组分型鱼类组织DNA提取液，其特征在于，

所述乙二胺四乙酸和/或乙二胺四乙酸钠盐的摩尔浓度为3～8mM；所述氯化钠的摩尔浓度为3～7mM；所述十二烷基硫酸钠的质量分数为0.5～5％；所述强碱的氢氧根离子的摩尔浓度为150～250mM。

3.根据权利要求1所述的双组分型鱼类组织DNA提取液，其特征在于，

所述乙二胺四乙酸和/或乙二胺四乙酸钠盐的摩尔浓度为5mM；所述氯化钠的摩尔浓度为5mM；所述十二烷基硫酸钠的质量分数为1％；所述强碱的氢氧根离子的摩尔浓度为200mM。

4.根据权利要求1至3任一项所述的双组分型鱼类组织DNA提取液，其特征在于，

所述强碱选自NaOH和/或KOH。

5.根据权利要求4所述的DNA提取液，其特征在于，所述中和液包括：含有吐温-20的pH值为6.8的Tris-HCl缓冲液，其中所述中和液中的吐温-20的质量分数为0.05％；所述中和液中的Tris的摩尔浓度为0.5mM。

6.根据权利要求4所述的DNA提取液，其特征在于，所述中和液还包含以下物质中的至少一种：

牛血清白蛋白，

明胶，和

二硫苏糖醇。

7.根据权利要求6所述的DNA提取液，其特征在于，基于所述中和液的总体积，所述中和液还包含0.02～0.1mg/mL的牛血清蛋白、0.2～2mg/mL的明胶和0.02～1mg/mL的二硫苏糖醇中的至少一种。

8.一种提取鱼类组织DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将鱼类组织与权利要求1至7任一项所述的裂解液混合，在20～85℃的水浴中保持10～30min，再与权利要求1至7任一项所述的中和液混合，之后离心处理，获得的上清液即为含有DNA的溶液。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，在50～65℃的水浴中保持10～20min。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，在55℃的水浴中保持10min。

11.根据权利要求8至10任一项所述的方法，其特征在于，所述裂解液和所述中和液的体积比为10:3～6。

12.根据权利要求11所述的方法，所述鱼类组织与所述裂解液的比例为10～25mg:200～400μl。

13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述鱼类组织、所述第一组分和所述第二组分的比例为25mg:400μL:120μL。

14.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述混合的方式为振荡。

15.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述鱼类组织选自：肌肉、内脏、鱼鳍、鳞片或骨骼。