[发明专利]裂解液、提取液、裂解和提取方法、试剂盒及应用、PCR体系

说明书

本发明公开了一种裂解液、DNA提取液、裂解和提取方法、DNA提取试剂盒及应用、PCR体系。该裂解液，用于裂解鱼类组织而释放出DNA，包括：乙二胺四乙酸和/或乙二胺四乙酸钠盐、氯化钠、十二烷基硫酸钠、强碱以及水，其中相对于裂解液而言，乙二胺四乙酸和/或乙二胺四乙酸钠盐的摩尔浓度为2～10mM，氯化钠的摩尔浓度为1～10mM，十二烷基硫酸钠的质量分数为0.1～10％，并且强碱的氢氧根离子的摩尔浓度为100～300mM。与现有技术相比，本发明的裂解液可以在更短时间内提供鱼类组织PCR扩增所需的DNA模板，整个过程不会造成样本DNA的减少或丢失，并且操作简单方便，易于掌握。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别涉及一种裂解液、鱼类组织DNA提取液、裂解方法、提取鱼类组织DNA的方法、鱼类组织DNA提取试剂盒及其应用、扩增鱼类组织DNA的PCR体系。

背景技术

动物组织DNA提取的主要方法有蛋白酶裂解后的酚-氯仿提取、异丙醇或异戊醇提取和SDS法，还有针对线粒体DNA提取的氯化铯沉淀法、chelex-100或吐温(Tween)法和尿素提取法等，目前应用较为广泛的是相对简单方便的商业化动物组织DNA提取试剂盒。通过这些方法获得的基因组DNA，一般能去除原来组织样本中的蛋白质和脂肪，还能通过醇类沉淀去除酚类等试剂，所得DNA纯度较高，能够满足大部分实验要求。

获取动物组织DNA是PCR分析和其他分子生物学研究的基础，这些技术和分析方法被应用到诸多研究和检测领域，如对核DNA或线粒体DNA的遗传多样性分析、物种鉴定和目前DNA条形码技术分析等。但很多时候根据实验目的不同，对DNA纯度的要求也不同，在一些快速分析检测中更加注重DNA提取过程的快速、准确和灵敏性。

鱼类组织具有易变质腐败，保存难度大于其他肉类的特点。因此，在提取鱼类组织DNA时，要求提取过程快速准确。然而，上述各种动物组织DNA提取方法由于操作过程复杂、步骤繁琐、耗时长，并且提取试剂复杂，往往不能满足鱼类组织DNA提取的需要，有时还会因试剂残留而影响后续PCR扩增过程，甚至微量样品处理后DNA总量不足难以进行PCR扩增，尤其难以满足于快速检测和鉴定领域。此外，个别提取方法，如酚-氯仿提取法，还具有毒性强，对研究者健康损害大的缺点。对于某一特定的鱼类肌肉组织，如鱼类肌肉还具有脂肪含量低，易于处理，细胞裂解后即可释放DNA，鳞片和鱼鳍类似于哺乳动物的指甲，含有大量的角蛋白，对其进行DNA提取时，不需过多的去除脂肪，而要去除大量的角蛋白。而现有动物组织DNA提取方法在于去除组织中的蛋白质和脂肪。很显然，现有的动物组织DNA的提取方法不利于鱼类研究。

因此，亟需一种能够快速准确提取鱼类组织中DNA的方法，以利于后续在鱼类快速检测和鉴定中的研究。

发明内容

针对鱼类组织的特点，本发明实施例公开了一种鱼类组织DNA提取液及提取方法，以达到快速提取鱼类组织中DNA的目的，从而加快鱼类快速检测和鉴定等研究。

本发明提供了一种裂解液，其用于裂解鱼类组织而释放出DNA，包括：

乙二胺四乙酸和/或乙二胺四乙酸钠盐、氯化钠、十二烷基硫酸钠、强碱以及水，

其中相对于裂解液而言，乙二胺四乙酸和/或乙二胺四乙酸钠盐的摩尔浓度为2～10mM，氯化钠的摩尔浓度为1～10mM，十二烷基硫酸钠的质量分数为0.1～10％，并且强碱的氢氧根离子的摩尔浓度为100～300mM。

优选地，所述乙二胺四乙酸和/或乙二胺四乙酸钠盐的摩尔浓度为3～8mM；所述氯化钠的摩尔浓度为3～7mM；所述十二烷基硫酸钠的质量分数为0.5～5％；所述强碱的氢氧根离子的摩尔浓度为150～250mM。

更优选地，所述乙二胺四乙酸和/或乙二胺四乙酸钠盐的摩尔浓度为5mM；所述氯化钠的摩尔浓度为5mM；所述十二烷基硫酸钠的质量分数为1％；所述强碱的氢氧根离子的摩尔浓度为200mM。