[发明专利]一种虾青素十六碳二烯酸单酯的制备方法

权利要求书

1.一种虾青素十六碳二烯酸单酯的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一、粗提液的制备：

用天平称取5.0g雨生红球藻藻粉，加入浓度为0.5-0.7mg/mL的纤维素酶液200mL，酶反应pH为4.0-5.0，在45-50℃的条件下破壁25-30min，然后在5000rpm条件下离心5min，弃上清后，将500mL的丙酮加入藻粉中，浸提40min，再次离心后，弃去下层沉淀，制得粗提液；将所述粗提液浓缩蒸干，充氮，于-20℃条件下保存，备用；

步骤二、溶剂系统的建立：

按体积比4:1:2配制正己烷-乙腈-甲醇溶剂系统；分别按照上述比例配制溶剂系统溶液1500mL，置于分液漏斗中，剧烈振荡充分混合后静置分层，平衡后将上下两相分开，以下相作为流动相，上相作为固定相，在使用前上下相分别超声脱气30min；

步骤三、高速逆流色谱纯化：

打开泵，将超声脱气后的上相作为固定相以30mL/min的流速泵入到高速逆流色谱仪中，直至上相充满整个HSCCC分离管中，暂停泵，将进液端放到流动相的试剂瓶中，打开主机的电源，设定转速850r/min，启动泵；在出液端用干净的量筒接液，在474nm波长下采集数据，收集洗脱时间为31-40min的目标成分，初步用TLC分析流出物，合并相同组分，制得化合物，即虾青素十六碳二烯酸单酯。

2.如权利要求1所述的一种虾青素十六碳二烯酸单酯的制备方法，其特征在于：还包括步骤四、纯化物的鉴定：采用高效液相色谱HPLC法或采用ESI-MS法分析所述化合物，或采用高效液相色谱HPLC法分析皂化后的所述化合物。

3.如权利要求2所述的一种虾青素十六碳二烯酸单酯的制备方法，其特征在于：所述采用高效液相色谱HPLC法：将所述化合物配成2mg/mL的样品溶液，高效液相的条件：进样量5μL，柱温35℃，检测波长474nm，流速0.2mL/min；分析所述化合物的保留时间和特征吸收峰，所述化合物的保留时间为44.5min，特征吸收峰为408nm。

4.如权利要求2所述的一种虾青素十六碳二烯酸单酯的制备方法，其特征在于：所述ESI-MS法采用正离子模式；参数设置如下：氮气干燥流量10.0L/min，雾化压力为20psi，毛细管电压+5000V，端板电压+4000V，毛细管出口电压80V，干燥温度200℃，雾化室温度50℃，干燥气体压力20psi，雾化气体压力50psi；一级质谱m/z为832.4。

5.如权利要求2所述的一种虾青素十六碳二烯酸单酯的制备方法，其特征在于：采用高效液相色谱HPLC法分析皂化后的所述化合物：将所述化合物12.5mg溶解在150mL的二氯甲烷溶液中，作为每组试验的样品溶液，然后加入含质量体积浓度为15.6％的NaOH的甲醇溶液，在磁力搅拌条件下，15.14℃温度下反应9.17min后，终止反应；加入蒸馏水直至溶液出现分层，上层漂浮有白色泡沫，下层呈红色的澄清溶液，离心弃去上清后，将下层溶液完全蒸干得到皂化产物，用HPLC法分析产物的保留时间和特征吸收峰，皂化后的所述化合物的保留时间为12.7min。

6.如权利要求1所述的一种虾青素十六碳二烯酸单酯的制备方法，其特征在于：所述步骤一中，加入浓度为0.6mg/mL的纤维素酶液200mL，在50℃的条件下破壁30min。