[发明专利]一种exosome来源的与肝癌相关的miRNA标志物及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医学领域，具体涉及一种exosome来源的与人类肝癌相关的miRNA标志物及其用途，更具体的涉及人类血液中肿瘤源性的exosome来源的miRNA-46a及其在诊断肝癌中的应用。

背景技术

微小RNA(microRNA，miRNA)来源于长链RNA初始转录产物(Pri-miRNA)，Pri-miRNA在细胞核中经酶切作用，形成具有茎环结构的miRNA前体，miRNA前体转运至胞质后，被进一步加工成miRNA；成熟的miRNA在特定的宿主细胞内与脂质或脂蛋白结合形成微囊泡，以外切酶体形式分泌至胞外，经体液微循环，被内吞入特定的受体细胞内发挥特定调节功能。肿瘤相关miRNA可能来源于肿瘤细胞死亡、溶化或肿瘤细胞向周围环境所释放的miRNA。miRNA可在转录后水平通过与靶基因特异性的碱基互补配对，引起靶基因的降解或者抑制其翻译，调控癌基因和/或抑癌基因的表达，广泛参与肿瘤细胞增殖、凋亡、分化侵袭、迁移血管生成等，与多种肿瘤的发生发展及预后关系密切。因此，有学者提出了“癌microRNA”(OncomiRs)的观点，即认为某些miRNA的异常表达在肿瘤的发生发展中充当了类似癌基因的角色。

Exosomes是一种纳米级的小囊泡状结构，存在于血液或其他生物体液中。它形成于众多细胞(包括树突状细胞和肿瘤细胞)的胞吐作用。Exosomes的外膜是由脂质双分子层组成，其成分包含有选择性蛋白、mRNA和miRNA。在Exosomes中包含有大于120种的miRNA，exosome中的miRNA可以影响干细胞变异(let-7)、器官形成(miR-1)、造血作用(miR-181)、肿瘤发生(miR-17、miR-18、miR-19a、miR-20、miR-19b-1、miR-93-1)以及新陈代谢。

肝癌是严重威胁我国人民生活健康的疾病之一，其致死率位居第三位。全世界每年因肝癌死亡的患者中，约有40％来自中国。80％的肝癌常与慢性乙型肝炎病毒和/或丙型肝炎病毒感染有关。如此高的致死率是因为缺乏敏感而特异的无创性指标来进行早期诊断。由于早期肝癌症状不明显，通常在晚期才得以确诊，那时，由于大多存在癌细胞肝内或/及肝外转移，病人已经丧失了手术切除病灶的机会。

随着治疗方法和影像检测技术水平的提高，早期肝癌根治切除术后的五年生存率已大大提高。然而，由于大部分的肝癌患者在确诊的时候已经处于晚期，肝癌患者的整体治疗效果及病人预后都比较差。目前临床应用多种治疗手段(手术切除、放疗，化疗及联合治疗方法)，仍无法彻底解决肿瘤治疗中存在的复发和转移的问题。秉承早发现早治疗的原则，及早发现肝癌的发生和转移，对于改善患者预后，提高临床治疗效果至关重要。

目前对于肝癌的诊断主要依靠影像学上发现肝内肿物，包括超声、CT、核磁共振(MRI)等，同时结合血清中的肿瘤标志物如甲胎蛋白(AFP)等。但是，这两种方法的敏感性及特异性都不是十分令人满意。因此，开发一种高敏感性和特异性的肝癌诊断方法是亟待解决的问题。

发明内容

为了解决现有技术的不足，本发明提供了一种血液中肿瘤源性的exosome来源的与肝癌相关的miRNA标志物，所述标志物是exsome来源的miRNA-46a，其序列为：5’-UUCAUUCAUUACUUUUGUACGC-3’。

本发明还提供了exsome来源的miRNA-46a在诊断人类肝癌中的用途。

本发明还提供了一种检测肿瘤源性的exosome来源的与肝癌相关的miRNA-46a标志物的试剂，所述试剂是用于扩增所述miRNA-46a的引物对，或者是用于检测所述miRNA-46a的探针；优选地，用于扩增所述miRNA-46a的正向引物为：5’-actcaccagctggccattattacttttggta-3’，反向引物为：5’-cgccgcagtgcgtgtcgtggagt-3’；

本发明还提供了一种诊断人类肝癌的试剂盒，其包含检测肿瘤源性的exosome来源的miRNA-46a标志物的试剂，所述试剂是用于扩增所述miRNA-46a的引物对，或者是用于检测所述miRNA-46a的探针。进一步地，所述试剂盒还包含PCR反应常用的试剂和酶，所述常用试剂包含PCR反应缓冲液、核糖核酸酶抑制剂、dNTP等；所述酶包含M-MLV逆转录酶、polyA多聚酶；所述试剂盒还可以包括标准品和/或对照品。