[发明专利]一种心肌梗死易感基因检测分型试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种心肌梗死易感基因检测分型试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括DNA提取试剂盒、DNA扩增试剂盒和测序试剂盒；所述DNA提取试剂盒采用天根生化科技有限公司的DP322型产品，所述DNA扩增试剂盒主要包括扩增引物、酶、PCR Buffer、dNTP Mixture、扩增引物，所述扩增引物为：1)F：5'-GCGAGAGCAGGCCATCTTACAT-3'，R：5'-CAGAAATTTGCTGTTCCGTGACTG-3',2)F：5'-AGCATGTTTGCTTTCAGGGTACAT-3'，R：5'-AATGGAGGTGTGGTCAGCACAG-3',3)F：5'-TCGGGAGACTCAGACACCACTG-3',R：5'-TCCTTGGAAATGCCAGGAAATG-3'；所述酶采用宝生物工程有限公司的TaKaRa Taq^TM酶；所述测序试剂盒采用美国ABI公司的Term inator v3.1Cycle Sequencing Kit。

2.根据权利要求1所述的心肌梗死易感基因检测分型试剂盒，其特征在于，所述扩增引物为基于基因MIA3、CDKN2A/B和CELSR2进行设计合成的。

3.一种如权利要求1-2任一所述的心肌梗死易感基因检测分型试剂盒的应用，其特征在于，具体步骤为：

(1)首先，将采集回来的样本按照DNA提取试剂盒提取获得样本基因组DNA；

(2)然后，将获得样本基因组DNA使用DNA扩增试剂盒进行扩增，得到扩增后的产物，随后将扩增后的产物进行电泳检测和纯化，得到纯化后的产物；

(3)接着，在纯化后的产物中加入测序试剂盒进行桑格测序反应；

(4)最后，将上述步骤桑格测序反应结束后的产物进行乙醇/EDTA纯化，纯化后上样到测序仪中，序列分析后进行分型判定。

4.根据权利要求3所述的心肌梗死易感基因检测分型试剂盒的应用，其特征在于，步骤(1)中样本为口腔黏膜细胞。

5.根据权利要求3所述的心肌梗死易感基因检测分型试剂盒的应用，其特征在于，步骤(4)中乙醇/EDTA纯化具体为从PCR仪上取下反应板，3800rpm离心1min；加2.5μl 0.125M EDTA，短离心；静置5min；加20μl预冷无水乙醇，贴封口膜，振荡混匀；3800rpm，4℃离心30min；离心结束后立即，倒置PCR板低速离心片刻，转速不超过800rpm；加60μl 75％的预冷乙醇，贴膜，振荡混匀；3800rpm，4℃离心15min；离心结束后立即，倒置PCR板低速离心片刻，转速不超过800rpm；PCR仪变性程序处理5min，或避光静置30min，挥发乙醇；加10μl Hi-Di甲酰胺，贴膜，短离心；95℃变性5min；迅速置于-20℃冰箱。