[发明专利]一种用于酿酒酵母电转感受态细胞的制备的重悬液及酿酒酵母电转感受态细胞的制备方法

权利要求书

1. 一种用于酿酒酵母电转感受态细胞的制备的重悬液，其特征在于：所述的重悬液包括5~15mM的甘氨酸- NaOH缓冲液、占所述的重悬液总体积1~5%的乙二醇、占所述的重悬液总体积2~8%的二甲基亚砜、0.5~1.5M的山梨醇。

2. 根据权利要求1所述的用于酿酒酵母电转感受态细胞的制备的重悬液，其特征在于：所述的重悬液包括9~11mM的甘氨酸- NaOH缓冲液、占所述的重悬液总体积2~4%的乙二醇、占所述的重悬液总体积4~6%的二甲基亚砜、0.9~1.1M的山梨醇。

3.根据权利要求2所述的用于酿酒酵母电转感受态细胞的制备的重悬液，其特征在于：所述的重悬液包括9.5~10.5mM的甘氨酸- NaOH缓冲液、占所述的重悬液总体积2.85~3.15%的乙二醇、占所述的重悬液总体积4.75~5.25%的二甲基亚砜、0.95~1.05M的山梨醇。

4.一种酿酒酵母电转感受态细胞的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤（1）、将酿酒酵母菌液于YPD固体培养基上培养8~24小时；

步骤（2）、从步骤（1）的YPD固体培养基上挑取单克隆，将所述的单克隆溶于YPD液体培养基中摇床培养8~24小时；

步骤（3）、将步骤（2）培养得到的菌液转接到YPD液体培养基进行扩大培养至菌液的A₆₀₀为0.8~1.0；

步骤（4）、将步骤（3）培养得到的菌液以450~550×g离心4~6min收集菌体；

步骤（5）、向步骤（4）收集的菌体中加入预先冰浴的权利要求1至3中任一项所述的重悬液和0.5~1.5M的二硫苏糖醇进行重悬，然后孵化4~6min；

步骤（6）、将步骤（5）得到的混悬液以450~550×g离心4~6min，收集菌体，然后用0.1~0.3倍的权利要求1至3中任一项所述的重悬液进行重悬，然后分管冻存。

5.根据权利要求4所述的酿酒酵母电转感受态细胞的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，在恒温培养箱中在28~30℃下进行培养。

6.根据权利要求4所述的酿酒酵母电转感受态细胞的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，在28~30℃下以100~200转/分钟的速度进行摇床培养。

7.根据权利要求4所述的酿酒酵母电转感受态细胞的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，在28~30℃下，在保证足够的空气的情况下，以100~120转/分钟的速度进行摇床培养。

8.根据权利要求4所述的酿酒酵母电转感受态细胞的制备方法，其特征在于：步骤（2）中的YPD液体培养基的体积为4~6mL，步骤（3）中的YPD液体培养基的体积为40~60mL。

9.根据权利要求4所述的酿酒酵母电转感受态细胞的制备方法，其特征在于：步骤（5）中，所述的重悬液的体积为8~10mL，二硫苏糖醇的体积为0.5~1.5mL。

10.根据权利要求4所述的酿酒酵母电转感受态细胞的制备方法，其特征在于：步骤（5）中，在孵化器上以90~110rpm的转速、28~30℃下进行孵化。