[发明专利]具有强寄生广谱病原真菌的哈茨木霉工程菌株的构建及其应用

权利要求书

1.具有如SEQ ID NO. 1所示核苷酸序列的Nox1基因在调控木霉重寄生病原真菌中的应用。

2.一种构建过表达nox1重组质粒的方法，其特征在于该构建方法为：以哈茨木霉SQR-T037的基因组DNA为模板以如SEQ ID NO. 2所示的引物infu-ter-fw和如SEQ ID NO. 3所示的引物infu-ter-rev扩增基因nox1下游500 bp为终止子；内切酶SalI酶切质粒pPcdna1-cel7b，切胶回收后纯化线性化质粒；利用In-Fusion HD Cloning Kit将终止子与线性化质粒融合，转入E.coli DH5α中，提取质粒，得到新的质粒pPcdna1-ter；

收集新鲜培养的哈茨木霉SQR-T037的菌丝，液氮研磨后，提取RNA，反转录后制备成cDNA，设计如SEQ ID NO. 4所示的引物Infu-nox-fw和如SEQ ID NO. 5所示的引物infu-nox-rev从哈茨木霉SQR-T037 cDNA中扩增nox1基因的cDNA，内切酶ClaI酶切pPcdna1-ter，切胶回收后纯化线性化质粒，利用In-Fusion HD Cloning Kit将nox1的cDNA片段与pPcdna1-ter融合，得到过表达nox1的重组质粒pPcdna1-nox1-hyg；所述Nox1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示。

3.采用权利要求2所述方法构建的过表达nox1重组质粒。

4.一种构建强寄生广谱病原真菌的木霉工程菌株的方法，其特征在于：以哈茨木霉SQR-T037的基因组DNA为模板以如SEQ ID NO. 2所示的引物infu-ter-fw和如SEQ ID NO. 3所示的引物infu-ter-rev扩增基因nox1下游500 bp为终止子；内切酶SalI酶切质粒pPcdna1-cel7b，切胶回收后纯化线性化质粒；利用In-Fusion HD Cloning Kit将终止子与线性化质粒融合，转入E.coli DH5α中，提取质粒，得到新的质粒pPcdna1-ter；

收集新鲜培养的哈茨木霉SQR-T037的菌丝，液氮研磨后，提取RNA，反转录后制备成cDNA，设计如SEQ ID NO. 4所示的引物Infu-nox-fw和如SEQ ID NO. 5所示的引物infu-nox-rev从哈茨木霉SQR-T037 cDNA中扩增nox1基因的cDNA，内切酶ClaI酶切pPcdna1-ter，切胶回收后纯化线性化质粒，利用In-Fusion HD Cloning Kit将nox1的cDNA片段与pPcdna1-ter融合，得到重组质粒pPcdna1-nox1-hyg，PEG-CaCl₂介导转化野生型哈茨木霉SQR-T037，获得遗传稳定的木霉工程菌SQR-NOX1-4；所述Nox1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示。

5.含有权利要求3所述过表达nox1重组质粒的工程菌株。

6.采用权利要求4所述的方法构建的木霉工程菌株。

7.权利要求3所述的过表达nox1重组质粒在强化木霉重寄生病原真菌及提高生防效果中的应用。

8.权利要求6中所述的木霉工程菌株在强化木霉重寄生病原真菌及提高生防效果中的应用。

9.权利要求6中所述的木霉工程菌株在制备以功能木霉为主的微生物菌肥中的应用。