[发明专利]一种改进型遗传性出血性毛细血管扩张症相关基因突变检测试剂盒

说明书

本发明涉及测遗传性出血性毛细血管扩张症相关基因突变检测试剂盒，通过检测ACVRL1基因、ENG基因、SMAD4基因及BMP9基因编码区及侧翼序列是否存在突变，而诊断该待测个体中遗传性出血性毛细血管扩张症的发生和类型。本发明还涉及一种检测待测个体中是否存在ACVRL1基因、ENG基因、SMAD4基因及BMP9基因编码区及侧翼序列基因突变的试剂盒，从而判断待测个体中是否因具有上述基因突变相关的动静脉畸形、肺动脉高压等疾病。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及检测遗传性出血性毛细血管扩张症相关基因突变的试剂盒。

背景技术

遗传性出血性毛细血管扩张症是一种系统性疾病，平均发病率约为 1/5000-1/800。临床表现为鼻出血，皮肤粘膜毛细血管扩张以及肺脏、肝脏、胃肠道、脑、脊髓等系统的动静脉畸形。该病发病年龄从自幼至几十岁，鼻出血是最常见且最早发现的临床特征。由于发病较晚，各组织的临床特征出现的时间不一致，因此，遗传性出血性毛细血管扩张症发病初期常常被误诊为单纯难治性鼻出血，而内脏动静脉畸形造成的出血往往是危及生命却难以发现的临床病变，因此，目前的临床诊断策略存在一定局限性。

遗传性出血性毛细血管扩张症属于常染色体显性遗传性疾病，男女发病几率均等。目前发现ENG、ACVRL1、SMAD4及BMP9四个基因突变与其发病有关。按照其致病基因及发病机制的不同将遗传性出血性毛细血管扩张症分为四种类型：1)遗传性出血性毛细血管扩张症1型与转化生长因子β (transforming growth factor-beta，TGF-beta)的结合蛋白内皮素(Endoglin， ENG)编码基因突变有关；2)遗传性出血性毛细血管扩张症2型和激酶1样激活素受体(Activin A receptor,type II-like 1；ACVRL1；Activin receptor-likekinase-1,ALK1)基因突变有关；3)合并青少年息肉病的综合征型遗传性出血性毛细血管扩张症和SMAD4基因(SMA-and MAD-related protein 4)突变有关； 4)遗传性出血性毛细血管扩张症5型和骨形成相关蛋白9(Bone morphogenetic protein 9,BMP9,also known asGDF2)有关。遗传学研究发现约80％遗传性出血性毛细血管扩张症和ENG基因和ACVRL1基因突变有关，不同地区，两个基因相关的遗传性出血性毛细血管扩张症患者所占比率不同；约1-2％的遗传性出血性毛细血管扩张症分别和SMAD4基因以及BMP9基因突变有关；四个已知的相关基因可解释约85％的遗传性出血性毛细血管扩张症患者的病因。鉴于此，遗传性出血性毛细血管扩张症的相关基因ENG、ACVRL1、SMAD4及 BMP9的突变筛查可以为多数患者发现分子病因，实现疾病的早期发现，早期诊断，预防严重内脏动静脉畸形致出血的发生。

中国专利申请CN1003555833A公开了一种家族性遗传性鼻出血致病基因突变检测试剂盒，其使用34对特异性引物，检测ACVRL1基因、ENG基因、 SMAD4基因编码区突变，在该检测方法中，其PCR反应需分步进行，扩增 ACVRL1基因和ENG基因，及扩增SMAD4基因分为两个反应步骤，方法较为繁琐，且未包含检测BMP9基因的步骤。

发明内容

本发明目的在于提供用于检测ACVRL1基因、ENG基因、SMAD4基因及BMP9基因编码区及侧翼序列突变的试剂盒。

本发明将为遗传性出血性毛细血管扩张症相关基因突变的临床和实验室筛查提供方便确实可靠的方法，有利于该病的早期发现和诊断。

使用本发明的试剂盒的检测方法为通过采用试剂盒中提供的特异性的 37对引物进行PCR扩增，所述引物如SEQ ID NO：1-74所示，检测来自于患者的待测样本中是否存在ACVRL1基因、ENG基因、SMAD4基因及BMP9 基因编码区及侧翼序列突变，而判断该患者是否为遗传性出血性毛细血管扩张症患者，并进行分型诊断。

所述试剂盒特异性引物SEQ ID NO:1-74具体信息如下：