[发明专利]一种测定养血清脑水提浸膏中生物碱成分含量的方法

权利要求书

1.一种测定养血清脑水提浸膏中生物碱成分含量的方法，所述方法，包括以下步骤：供试品溶液的制备、对照品溶液的制备和含量测定，

其中，所述供试品溶液的制备包括以下步骤：取养血清脑水提浸膏约0.2g，精密称定，35％-45％甲醇10mL超声溶解，上至已处理好的规格为500mg/6mL的ProElut C₁₈-U柱，用35％-45％甲醇5mL洗涤，洗涤液弃去，用甲醇4.5mL洗脱，收集洗脱液，用甲醇定容至5mL，摇匀，即得，

其中，所述对照品溶液的制备包括以下步骤：以钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱作为对照品，用甲醇配制成每毫升含钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱为0.008-0.012mg、0.01-0.02mg、0.001-0.002mg和0.004-0.006mg的溶液，即得，

其中，所述含量测定，包括以下步骤：分别取对照品溶液和供试品溶液各1-3ul，注入液相色谱仪，记录峰面积，外标法计算供试品溶液中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱的含量，

所述含量检测时液相色谱仪色谱条件如下：色谱柱ACQUITY UPLC CSH C₁₈，规格为2.1×100mm，梯度洗脱，其中流动相为：流动相A为0.02％-0.2％乙酸铵水溶液，流动相B为乙腈；流速：0.35-0.45ml/min；检测波长：240-250nm，

梯度洗脱程序如下：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相的乙酸铵优选为0.02-0.1％。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

步骤1：对照品溶液的制备

精密称取钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱对照品适量，分别置于容量瓶中，加甲醇溶解，分别制得每毫升含钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱为0.01mg、0.015mg、0.0016mg和0.005mg的溶液，既得；

步骤2：供试品溶液的制备

取养血清脑水提浸膏约0.2g，精密称定，35％-45％甲醇10mL超声溶解，上至已处理好的规格为500mg/6mL的ProElut C₁₈-U柱，用35％-45％甲醇5mL洗涤，洗涤液弃去，用甲醇4.5mL洗脱，收集洗脱液，用甲醇定容至5mL，摇匀，即得；

步骤3：含量测定法

分别取对照品溶液和供试品溶液各2ul，注入液相色谱仪，记录峰面积，外标法计算含量；

所述的液相色谱仪色谱条件如下：

色谱柱ACQUITY UPLC CSH C₁₈规格为2.1×100mm，流动相：流动相A为0.02％-0.2％乙酸铵水溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱程序见下表；流速：0.35-0.45ml/min，检测波长：240-250nm；

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

步骤1：对照品溶液的制备

精密称取钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱对照品适量，分别置于容量瓶中，加甲醇溶解，分别制得每毫升含钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱为0.01mg、0.015mg、0.0016mg和0.005mg的溶液，既得；

步骤2：供试品溶液的制备

取养血清脑水提浸膏约0.2g，精密称定，40％甲醇10mL超声溶解，上至已处理好的规格为500mg/6mL的ProElut C₁₈-U柱，用40％甲醇5mL洗涤，洗涤液弃去，用甲醇4.5mL洗脱，收集洗脱液，用甲醇定容至5mL，摇匀，即得；

步骤3：含量测定法

分别取对照品溶液和供试品溶液各2ul，注入液相色谱仪，记录峰面积，外标法计算含量；

所述的液相色谱仪色谱条件如下：

色谱柱ACQUITY UPLC CSH C₁₈规格为2.1×100mm，流动相：流动相A为0.05％乙酸铵水溶液，流动相B为乙腈，梯度洗脱程序见下表；流速：0.35-0.45ml/min，检测波长：246nm；