[发明专利]一种测定养血清脑水提浸膏中生物碱成分含量的方法

说明书

本发明涉及一种测定养血清脑水提浸膏中生物碱成分含量的方法，本发明所述方法，包括以下步骤：供试品溶液的制备、对照品溶液的制备和含量测定，本发明所述方法能够有效去除干扰成分，同时可以对生物碱成分进行有效富集，该方法高效快速，稳定性好，灵敏度高、能够在5分钟内实现四种生物碱成分的有效分离，经验证本发明的质量控制方法精密度、重现性、稳定性良好，能够有效测定养血清脑水提浸膏中生物碱成分。

技术领域

本发明涉及一种中药提取物中有效成分的含量测定方法，特别涉及一种测定养血清脑水提浸膏中生物碱成分含量的方法。

背景技术

养血清脑颗粒和养血清脑丸是由当归、川芎、白芍、熟地黄、钩藤、鸡血藤、夏枯草、决明子、珍珠母、延胡索、细辛十一味中药和辅料制成的复方中药。养血清脑水提浸膏是养血清脑颗粒和养血清脑丸的制剂中间体。制备工艺为：熟地黄、钩藤、鸡血藤、夏枯草、珍珠母、细辛加水煎煮，滤过，浓缩，加乙醇静置，滤过，回收乙醇并浓缩至适量，即得养血清脑水提浸膏。

《中国药典》2015年版公开了养血清脑两种制剂的含量检测，都是对芍药苷的检测，其供试品的制备方法为：取本品内容物，研细，取约0.08g，精密称定，置20ml烧杯中，加0.2％碳酸氢钠，超声处理5分钟，通过D101大孔吸附树脂柱，用水洗脱，弃去洗脱液，再用甲醇洗脱，收集洗脱液，加水至刻度，摇匀，离心5分钟，取上清液，滤过，取续滤液，即得；色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以异丙醇-甲醇枸橼酸溶液(2：18：80)为流动相，检测波长为240nm，理论板数按照芍药苷峰计算应不低于2000。

养血清脑制剂中，钩藤在配方中发挥着重要作用，具有清热平肝，息风定惊功效，与养血清脑制剂“养血平肝，活血通络”的功效相契合。而生物碱是钩藤药材的主要活性成分，在药典中并没有对养血清脑制剂中的钩藤成分进行检测的报道。

发明人前期针对养血清脑水提浸膏中的生物碱成分进行了深入研究，利用SPE-UPLC方法，建立了生物碱成分的分离纯化方法，实现生物碱成分的有效分离。采用串联四级杆飞行时间质谱(Q-TOF/MS)液质联用仪对养血清脑水提浸膏中的生物碱成分进行了结构鉴定，通过对一级、二级碎片分析和对照品比对，确定主要含有四种生物碱成分，分别为钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱。

针对养血清脑水提浸膏，目前已经建立起了一整套全面地的工艺质量控制体系，但是，还没有针对生物碱成分的质量分析方法。

为进一步提升产品质量控制水平，全面掌握产品质量，发明人针对养血清脑水提浸膏中的生物碱成分建立了含量测定方法，并进行了方法学验证。

发明内容

本发明涉及一种测定养血清脑水提浸膏中生物碱成分含量的方法，该方法采用超高效液相色谱法。

本发明所述方法，包括以下步骤：供试品溶液的制备、对照品溶液的制备和含量测定。

其中，所述供试品溶液的制备包括以下步骤：取养血清脑水提浸膏约0.2g，精密称定，35％-45％甲醇10mL超声溶解，上至已处理好的ProElut C₁₈-U(500mg/6mL)柱，用35％-45％甲醇5mL洗涤，洗涤液弃去，用甲醇4.5mL洗脱，收集洗脱液，用甲醇定容至5mL，摇匀，即得；

其中，所述对照品溶液的制备包括以下步骤：

以钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱作为对照品，用甲醇配制成每毫升含钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱为0.008-0.012mg、0.01-0.02mg、0.001-0.002mg和0.004-0.006mg的溶液，既得；

其中，所述含量测定，包括以下步骤：分别取对照品溶液和供试品溶液各1-3ul，注入液相色谱仪，记录峰面积，外标法计算供试品溶液中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱的含量；