[发明专利]基于重组载体pGPE57的重组菌株E.coliGPE10及其构建方法和应用在审
| 申请号： | 201610713076.8 | 申请日： | 2016-08-23 |
| 公开（公告）号： | CN107760704A | 公开（公告）日： | 2018-03-06 |
| 发明（设计）人： | 汪洋;张开;易军;苏会娟 | 申请（专利权）人： | 南京理工大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京理工大学专利中心32203 | 代理人： | 刘海霞,朱显国 |
| 地址： | 210094 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 重组 载体 pgpe57 菌株 coligpe10 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种重组载体pGPE57，其特征在于，为将pKD46质粒中的bet元件替换成pfu-Ssod7DNA序列形成全长序列为SEQ ID NO.17的重组质粒pGPE57。
2.基于如权利要求1所述的重组载体pGPE57的质粒pUC-YZ，其特征在于，为将pGPE57质粒中的repA101和OriR101元件替换成LacY、pUC ori、和LacZ DNA序列形成全长序列为SEQ ID NO.18的质粒pUC-YZ。
3.基于如权利要求2所述的质粒pUC-YZ的重组菌株E.coli GPE10，其特征在于，为将质粒pUC-YZ整合到DH10B中，形成含有Amp、AraC、Pbad、gam、pfu-Ssod7和exo基因元件的重组菌株E.coli GPE10。
4.如权利要求1所述的重组载体pGPE57的构建方法，其特征在于，通过合成引物PCR扩增pfu-Ssod7DNA序列和pKD46目的片段，将pfu-Ssod7DNA序列和pKD46目的片段连接，得到重组质粒pGPE57。
5.如权利要求2所述的质粒pUC-YZ的构建方法，其特征在于，通过合成引物PCR扩增LacY、pUC ori、和LacZ和pGPE57目的片段，将LacY、pUC ori、LacZ序列和pGPE57目的片段连接，得到重组质粒pUC-YZ。
6.如权利要求3所述的重组菌株E.coli GPE10的构建方法，其特征在于，将酶切后的pUC-YZ质粒转化进DH10B感受态细胞，将Amp、AraC、Pbad、gam、pfu-Ssod7和exo基因元件整合到DH10B基因组上，形成重组菌株E.coli GPE10。
7.如权利要求3所述的重组菌株E.coli GPE10在多片段DNA组装中的应用。
8.如权利要求7所述的重组菌株E.coli GPE10在多片段DNA组装中的应用，其特征在于，将有同源序列的多个PCR扩增产物在经阿拉伯糖诱导后的E.coli GPE10细胞内直接进行定向DNA组装。
9.如权利要求7所述的重组菌株E.coli GPE10在多片段DNA组装中的应用，其特征在于，将PCR扩增产物和线性化酶切产物在经阿拉伯糖诱导后的E.coli GPE10细胞内直接进行定向DNA组装。
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