[发明专利]一种逆转录病毒载体介导HSV1的方法在审
| 申请号： | 201610715466.9 | 申请日： | 2016-08-25 |
| 公开（公告）号： | CN107779460A | 公开（公告）日： | 2018-03-09 |
| 发明（设计）人： | 杨美宁 | 申请（专利权）人： | 杨美宁 |
| 主分类号： | C12N15/54 | 分类号： | C12N15/54;C12N15/867;C12N5/10;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 741000 甘*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 逆转录 病毒 载体 hsv1 方法 | ||
1.一种逆转录病毒载体介导HSV1的方法，用PolyFect Transfection试剂介导重组逆转录病毒转染入包装细胞系PT67，通过G418筛选建立稳定产病毒的细胞株，将病毒感染人胃癌细胞，检测HSV1tk自杀基因治疗系统在体外的抗肿瘤效应；经酶切鉴定和DNA序列测定， HSV1tk基因成功定向插入到pLXSN载体中；重组病毒DNA转染包装细胞，筛选出对G418具稳定抗性的克隆PT67／tk，获取病毒滴度为4×１０４cfu/mL的重组逆转录病毒培养液；感染胃癌细胞SGC7901后再筛选出G418抗性克隆株SGC7901／tk；丙氧鸟苷（GCV）对SGC7901/tk有明显杀伤作用，对SGC7901无明显毒性。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是：经酶切鉴定和DNA序列测定， HSV1tk基因成功定向插入到pLXSN载体中；重组病毒DNA转染包装细胞，筛选出对G418具稳定抗性的克隆PT67／tk，获取病毒滴度为4×１０４cfu/mL的重组逆转录病毒培养液；感染胃癌细胞SGC7901后再筛选出G418抗性克隆株SGC7901／tk；丙氧鸟苷（GCV）对SGC7901/tk有明显杀伤作用，对SGC7901无明显毒性。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征是：感染胃癌细胞SGC7901后再筛选出G418抗性克隆株SGC7901／tk；丙氧鸟苷（GCV）对SGC7901/tk有明显杀伤作用，对SGC7901无明显毒性。
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