[发明专利]一种视网膜色素变性检测T淋巴细胞方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种视网膜色素变性检测T淋巴细胞方法，具体地说是以一种视网膜色素变性检测T淋巴细胞方法。

背景技术

目前公知的原发性视网膜色素变性(retinal pigmentation,RP)，属中医眼科的“高风内障”范畴，是一种以视网膜色素上皮和光感受器结构与功能进行性受损的遗传性眼病。临床上以夜盲、进行性视野缩窄、中心视力逐渐减退，最终导致失明为主要表现。RP在一般人群中的发病率约为1/4000～1/2000，在我国的群体患病率为1/3467。目前其发病机理尚不明了，可能涉及多方面的因素。近年来围绕免疫功能与RP发病机理间的联系，已从不同侧面和层次进行了较多的研究，研究表明RP患者存在细胞免疫和体液免疫功能的异常，不少学者认为可能是自身免疫反应所致。

发明内容

诊断标准：

研究对象：为湖南中医学院第一附属医院视网膜色素变性中心1999～2001年的门诊及住院患者，具有典型的RP临床表现，经详细检查排除合并感染、肿瘤、贫血及其他自身免疫性疾病等，确诊RP者共52例。其中男32例，女20例；年龄最大者65岁，最小为13岁，平均年龄(3767±287)岁；双眼无色素沉着者2例，单眼色素变性者1例，结晶样色变性者5例；视力下降、夜盲时间最长者37年，最短者4年，平均病程(1797 ±979)年。健康对照组为来自我院研究生、大专生和职工，排除全身性疾病及眼部疾病，共22例。其中男14例，女8例；年龄最大者62岁，最小者15岁，平均年龄为(3634±1176)岁。分组，52例RP患者中属肝肾阴虚者41例，平均年龄为(4115±852)岁；属脾肾阳虚者11例，平均年龄为(4360±962)岁。根据病情分为病轻组和病重组，视力小于02、视野小于15°(颞侧)者为病重组共24例，视力大于02、视野大于15°(颞侧)者为病轻组共28例。诊断及辨证标准，诊断标准；参考高等医学院校第3版教材《眼科学》和宋振英主编的《眼科诊断学》制定。辨证参考标准，参考《中医眼科学》第5版教材，及中医虚证辨证参考标准，结合导师经验制定。①肝肾阴虚型：眼局部症状：夜盲、进行性视野缩窄，中心视力逐渐减退，两眼干涩不适，具备两项以上；全身症状：头昏耳鸣，腰膝酸软，五心烦热，颧红咽干，女子月经量少色红，男子遗精，舌红少苔或无苔，脉细数，具备1项以上。②脾肾阳虚型：眼局部症状：与肝肾阴虚型相同，但无两眼干涩不适，具备任意两项以上；全身症状：形寒肢冷，面色白，腰酸神疲，懒言食少，大便溏泄，五更泄泻，小便清长，或夜尿频多，女子白带多且质地清稀，男子阳萎早泄，舌淡胖有齿印或脉沉迟，具备1项以上。观察指标及方法；红细胞c3b受体花环结合率(RCR)及免疫复合物花环结合率(RICR)的测定，用郭峰法。主要试剂酵母多糖冻干试剂及补体致敏酵母多糖冻干试剂，均由第二军医大学长海医院免疫室提供。0.25%戊二醛(含主要成份OHCCH2CH2CH2CHO 2～3g/L)、甲醇、瑞氏染液等均由湖南中医学院第一附属医院中心实验室提供。血清中免疫复合物(CIC)含量测定，用PEG沉淀法。主要试剂PEG-6000由天津天泰精细化工学品有限公司经销。外周血T淋巴细胞表面人类白细胞DR抗原(HLADR)的测定，采用外周静脉血3mL以肝素抗凝，加Hanks液对倍稀释，经FicollHypaque密度梯度离心20min，取外周血单核细胞(PBMC)层经Hanks液洗2遍，加PRMI-1640洗1遍，用RPMI-1640完全培养基(内含10mol/L Hgpes buffer，青霉素100 U/mL)调细胞浓度至5×106/mL于小试管，取100μL于小试管内加DR单克隆抗体，后置4℃温度下1h洗2次，弃上清液悬浮至20μL，取样滴于载玻片上加盖玻片，置荧光显微镜下观察，计算200个细胞及其中荧光阳性细胞数，计百分率。结果；RP患者RCR、RICR均降低，CIC值增高，HLADR表达增高，与正常组比较差异有显著性(P＜0.05或P＜0.01)；RP患者的RCR与CIC呈显著负相关关系(P＜0.01)；而脾肾阳虚组与肝肾阴虚组比较，RCR、RICR下降更低、CIC值和HLADR表达更高，差异均有显著性(P＜0.01)。