[发明专利]一种获取rDNA ITS2序列用来对铁皮枫斗鉴定的方法有效
| 申请号： | 201610740314.4 | 申请日： | 2016-08-26 |
| 公开（公告）号： | CN106399475B | 公开（公告）日： | 2019-06-04 |
| 发明（设计）人： | 姚辉;马双姣;陈士林;宋经元;杨兵勋;杨培;周红 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院药用植物研究所;浙江天皇药业有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6806;C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 崔自京 |
| 地址： | 100193 北京*** | 国省代码： | 北京;11 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 铁皮枫斗 标准序列 药材 序列相似性 分子鉴定 两对引物 铁皮石斛 有效解决 种子种苗 重叠区域 原植物 比对 测序 扩增 分段 | ||
1.一种获取rDNA ITS2序列用来对铁皮枫斗进行鉴定的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)样品的DNA提取；
2)应用两对引物对ITS2序列分段进行PCR扩增；
用于分段扩增ITS2序列的引物为：
正向DO-2F：5’-GCATGGTGGCTCCTCGTG-3’；
反向DO-2R：5’-ATGGATTGGGATCACCTAAAA-3’；
正向DO-3F：5’-AAAGGCCTATGCTATTGTGA-3’；
反向DO-3R：5’-CGCTTATTGATATGCTTAAACTC-3’；
3)对分段扩增结果测序后，按重叠区域连接在一起，获得ITS2序列；
4)与SEQ ID No.1所示序列比对分析进行鉴定。
2.根据权利要求1所述的一种获取rDNA ITS2序列用来对铁皮枫斗进行鉴定的方法，其特征在于，所述样品为铁皮枫斗。
3.根据权利要求1所述的一种获取rDNA ITS2序列用来对铁皮枫斗进行鉴定的方法，其特征在于，由于铁皮枫斗药材基因组DNA降解严重，提取的DNA浓度很低，需加大模板DNA的体积；PCR扩增体系25μL，包括2×TaqPCR Mix12.5μL，2.5μmol·L-1的特异引物正反向各1.0μL，DNA模板溶液10.5μL。
4.根据权利要求1或权利要求2所述的一种获取rDNA ITS2序列用来对铁皮枫斗进行鉴定的方法，其特征在于，所述的PCR扩增条件为：
引物DO-2F/DO-2R进行PCR扩增反应参数：95℃5min；94℃30s，54℃30s，72℃45s，40个循环；72℃10min；
引物DO-3F/DO-3R进行PCR扩增反应参数：95℃5min；94℃30s，52℃30s，72℃45s，40个循环；72℃10min。
5.根据权利要求1或权利要求2所述的一种获取rDNA ITS2序列用来对铁皮枫斗进行鉴定的方法，其特征在于，用DNAMAN软件对样品的ITS2序列与SEQ ID No.1所示序列进行比对，序列相似性大于或等于99％，则鉴定为铁皮枫斗。
6.权利要求1-5任一项所述一种获取rDNA ITS2序列用来对铁皮枫斗进行鉴定的方法在鉴别铁皮枫斗及其基原植物、种子、种苗中的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国医学科学院药用植物研究所;浙江天皇药业有限公司，未经中国医学科学院药用植物研究所;浙江天皇药业有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201610740314.4/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：一种铁皮石斛干药材分子鉴定方法及其应用
- 下一篇：内燃机的控制装置
