[发明专利]一种抗真菌环脂肽棘白菌素B的制备方法

权利要求书

1.一种抗真菌环脂肽棘白菌素B的制备方法，其特征在于，该方法包括下列步骤：

1)固液分离棘白菌素B发酵液，棘白菌素B即ECB，具体包括如下步骤：取菌丝体，加入助滤剂珍珠岩，板框过滤收集棘白菌素B菌饼；菌饼用原发酵液体积40-80％的丙酮浸泡，充分搅拌，脱色除杂剂活性炭以质量体积比g/100ml计为0.5-2，搅拌均匀，直接板框过滤，收集滤液；

2)大孔吸附树脂ADS-17或X-5富集，具体包括如下步骤：滤液加水调节丙酮浓度至20-40％，上大孔吸附树脂ADS-17或X-5富集；

3)大孔吸附树脂经热无水甲醇洗脱，合并洗脱液，具体包括如下步骤：无水甲醇加热至45-50℃，直接洗脱大孔吸附树脂，合并甲醇洗脱液；所述无水甲醇洗脱大孔吸附树脂3～5个柱体积；

4)洗脱液浓缩，加氯化钠溶液，搅拌降温析晶，ECB粗品滤饼干燥，具体包括如下步骤：甲醇洗脱液浓缩至1倍柱体积左右，加等体积的以质量体积比g/100ml计浓度为5％-15％的氯化钠溶液，充分搅拌降温至2-10℃析晶，过滤得湿滤饼；湿滤饼于30-40℃干燥，得ECB粗品滤饼；

5)ECB粗品滤饼用甲醇过滤后，滤液上D318离子交换树脂柱，具体包括如下步骤：ECB粗品滤饼用少量40-60％甲醇溶解，过滤掉不溶物，滤液上D318离子交换树脂柱，D318离子交换树脂柱用65-90％甲醇磷酸缓冲液梯度洗脱，HPLC检测洗脱液ECB纯度，收集并合并纯度95％以上的部分；

6)D318离子交换树脂柱洗脱液浓缩，加氯化钠溶液，搅拌降温析晶，ECB滤饼干燥，具体包括如下步骤：D318离子交换树脂柱洗脱液真空浓缩至乳白色浑浊，加等体积5％氯化钠溶液，充分搅拌，降温至0-10℃，沉淀物析出完全，直接过滤得湿滤饼；湿滤饼于30-40℃干燥12h得干品；

7)收集ECB干品。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述棘白菌素B发酵液由高产菌株CGMCC No.8987发酵制备。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法包括下列步骤：

1)固液分离ECB发酵液，取菌丝体，加入助滤剂珍珠岩，板框过滤收集棘白菌素B菌饼；菌饼用原发酵液体积的40-80％丙酮浸泡，充分搅拌，加入以质量体积比g/100ml计为0.5-2的脱色除杂剂活性炭，搅拌均匀，直接板框过滤，收集滤液；

2)滤液加水调节丙酮浓度至20-40％，上大孔吸附树脂ADS-17或X-5富集；

3)无水甲醇加热至50℃，直接洗脱大孔吸附树脂3～5个柱体积，合并甲醇洗脱液；

4)甲醇洗脱液浓缩至1倍柱体积左右，加等体积的以质量体积比g/100ml计浓度为5％-15％的氯化钠溶液，充分搅拌降温至2-10℃，絮状沉淀析出完全，直接过滤得湿滤饼，滤饼于30-40℃干燥，得ECB粗品滤饼；

5)ECB粗品滤饼用少量40-60％甲醇溶解，过滤掉不溶物，滤液上D318离子交换树脂柱；用65-90％甲醇磷酸缓冲液梯度洗脱，HPLC检测洗脱液ECB纯度，收集并合并纯度大于95％部分；

6)洗脱液真空浓缩至乳白色浑浊，加等体积5％氯化钠溶液，充分搅拌，降温至0-10℃，沉淀物析出完全，直接过滤得湿滤饼，30-40℃干燥12h得干品；

7)收集ECB干品用于ECB转化生产。