[发明专利]一种抗真菌环脂肽棘白菌素B的制备方法

说明书

本发明提供一种抗真菌环脂肽棘白菌素B的制备方法，包括下列步骤：1)固液分离ECB发酵液；2)大孔吸附树脂ADS‑17或X‑5富集；3)大孔吸附树脂经热无水甲醇洗脱，合并洗脱液；4)洗脱液浓缩，加氯化钠溶液，搅拌降温析晶，ECB粗品滤饼干燥；5)ECB粗品滤饼用甲醇过滤后，滤液上反相树脂柱XT30；6)反相树脂柱XT30洗脱液浓缩，加氯化钠溶液，搅拌降温析晶，ECB滤饼干燥；7)收集ECB干品。该方法能简单有效的解决副产物洗脱困难，浪费溶剂的问题。能有效完成含水ECB的固液分离，显著减少产品降解。该方法简单易行，适于工业化生产，并能将棘白菌素B最终纯度提高到99％以上。

技术领域

本发明属于药物化学领域，具体涉及一种抗真菌环脂肽棘白菌素B的制备方法。

背景技术

棘白菌素类是新一代全身性抗真菌药，作用机理为抑制1，3-β-D葡聚糖合成酶活性，从而抑制真菌细胞壁的合成。其独特的作用靶点和确切的疗效，使其与多烯类，三唑类等药物成为抗真菌药物家族重要成员。

目前已经上市的此类药物有：卡泊芬净、米卡芬净和阿尼芬净。阿尼芬净具有无首过效应的特点，主要用于治疗念珠菌和曲霉菌引起的严重感染。

阿尼芬净是由发酵产物棘白菌素B(Echinocandin B，ECB)为原料，经化学或酶反应脱去亚油酸侧链，形成亲水性六元环肽母核，再经合成反应加上戊氧基三苯基甲酸侧链而得。

根据美国专利US4024235和US4024246，棘白菌素B可由Aspergillus nidulans，Aspergillus rugulosus发酵得到，本身在体外具有抗真菌活性。目前所用Echinocandin B发酵，存在产量不高，色素较重，结构类似物较多的问题。Echinocandin B具有两亲性质，不溶于水和非极性溶剂，易溶于低级醇类，化学性质不稳定，易降解。Echinocandin B的纯度直接影响转化后母核的纯度进而影响阿尼芬净的纯度。

Echinocandin B的制备方法具有工艺复杂，难于大规模生产的缺点。美国专利4288549中Lilly公司对分离纯化工艺进行过系统研究，但仅限于实验室工艺的研究，该工艺使用氯仿做萃取剂不利于环保，使用硅胶柱纯化，硅胶一次性使用，固废排放压力大。中国专利CN200910133117.6中菌体经过甲醇浸泡，大孔吸附树脂HP20吸附洗脱，氧化铝柱除色素，洗脱液蒸干得粗品，反相树脂层析制备，加水析晶，得ECB。该工艺反复蒸干复溶，操作复杂，产品容易降解。CN201110244359.X发酵菌体经一定浓度甲醇或乙醇浸泡，滤液经大孔吸附树脂吸附解吸。活性炭脱色，经过乙酸乙酯萃取，丙酮等溶剂结晶得ECB粗品。该工艺使用乙酸乙酯作萃取剂，容易形成乳化层，影响萃取效率。且乙酸乙酯易混杂大量浸提液中的甲醇或乙醇，不利于溶剂回收。CN201210066411.1使用膜过滤及原位浸提方法，浸提滤液经过纳滤浓缩，大孔树脂吸附，洗脱液经过脱色后再纳滤浓缩，减压浓缩，加水析出粗品固体。固体经过直接固液分离得湿粉，真空干燥的粗品。该工艺在微滤膜中原位 浸提过滤，滤液再经过纳滤浓缩。高有机溶剂对纳滤膜的溶胀作用较大，长时间使用，不利于产品截留和设备寿命。含棘白菌素B浓缩液加水析出固体，固液分离时，粘度较大，不利工业化放大。

发明内容

本申请提供了一种抗真菌环脂肽棘白菌素B的制备方法，能简单有效的解决副产物洗脱困难，浪费溶剂的问题。该方法包括下列步骤：

1)固液分离棘白菌素B发酵液，棘白菌素B即ECB；

2)大孔吸附树脂ADS-17或X-5富集；

3)大孔吸附树脂经热无水甲醇洗脱，合并洗脱液；

4)洗脱液浓缩，加氯化钠溶液，搅拌降温析晶，ECB粗品滤饼干燥。

5)ECB粗品滤饼用甲醇过滤后，滤液上D318离子交换树脂柱；