[发明专利]一种双标记尿嘧啶核苷-(13C;15N2)的合成方法

说明书

本发明涉及一种双标记尿嘧啶核苷‑(¹³C,¹⁵N₂)的合成方法，该方法以无水苯为溶剂，双标记尿素‑(¹³C,¹⁵N₂)和丙炔酸为原料进行环化反应，得到双标记尿嘧啶‑(¹³C,¹⁵N₂)；在Ar₂气氛下，乙腈作溶剂，双标记尿嘧啶‑(¹³C,¹⁵N₂)和1‑乙酰氧基‑2,3,5‑三苯甲酰氧基‑β‑D‑呋喃核糖混合，接着加入六甲基二硅氮烷和三氟甲基磺酸三甲基硅脂，经后处理后得到的中间体用氨水水解，即可得到双标记尿嘧啶核苷‑(¹³C,¹⁵N₂)。与现有技术相比，本发明工艺简单，收率较高，同位素丰度不下降，适合实验室生产双标记尿嘧啶核苷‑(¹³C,¹⁵N₂)。

技术领域

本发明涉及稳定同位素标记的有机化合物的制备方法，尤其涉及一种双标记尿嘧啶核苷-(¹³C,¹⁵N₂)的有机合成方法。

背景技术

尿嘧啶核苷是白色针状结晶或粉末，无气味，味稍甜而微辛，微溶于稀醇，不溶于无水乙醇，是构成动物细胞核酸的有关成分。在生物医学研究中是不可缺少的原料，同时也是制备生物药品的基本元素。尿嘧啶核苷是一种药物，常用于治疗抗巨型红血球贫血和肝、脑血管、心血管等疾病，也是制造氟尿嘧啶(S-FC)、脱氧核苷、碘苷(IDUR)、溴苷(BUDR)、氟苷(FUDR)等药物的主要原料。

为了研究尿嘧啶核苷及其衍生物药物对生物体作用机理，需要对化合物及其代谢物进行跟踪，但是由于化合物在高噪音背景、复杂的基质效应、前处理和质谱检测器等因素的影响下，对分析方法测定结果的影响较大。为了避免分析的不准确性，使用稳定同位素标记化合物，可以有效校正方法中出现的误差，显著提高了检测方法的稳定性。双标记尿嘧啶核苷-(¹³C,¹⁵N₂)作为同位素标记物可以有效而且准确的检测核苷类药物及其代谢物。

目前，制备尿嘧啶核苷的方法有RNA化学水解法和发酵法。传统的尿嘧啶核苷制备方法是使用RNA经化学水解，然后制备2种嘧啶核苷(Kazarinova LA, Livshits VA,Preobrazhenskaya ES,et al.Method for producing uridine-5'-monophosphate byfermentation using mutantstrains of coryneform bacteria [P].United StatesPatent:6344344,2002-02-05)，此法不仅需要大量的优质RNA原料，而且不适用于制备同位素标记尿嘧啶核苷；发酵法(王锐.嘧啶核苷的研究进展[J].生物技术通讯,2007,18(3):539～541.)是借助于微生物具有合成自身所需核苷的能力,通过对特定微生物的诱变处理，选育出营养缺陷型及核苷类似物抗性突变株,以解除代谢调节中的反馈抑制和反馈阻遏，从而达到在发酵过程中积累嘧啶核苷的目的，添加前体物发酵法是利用核苷酸生物合成途径的补救途径，通过在核苷生产菌的培养基中添加前体物尿嘧啶，使嘧啶碱基通过补救途径直接合成核苷，从而增加尿苷的生成量。发酵法具有发酵条件简单、周期短和产率高等优点，但是选育出有用的菌种较为困难，并且同位素丰度容易被稀释。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种方法简单、可行并适合批量生产的双标记尿嘧啶核苷-(¹³C,¹⁵N₂)的合成方法。