[发明专利]基于近红外荧光探针铜纳米簇的叶酸检测方法

权利要求书

1.基于近红外荧光探针铜纳米簇的叶酸检测方法，其特征在于，以磷酸缓冲水溶液(PBS)、铜纳米簇分散体系和待测样品组成叶酸检测体系，检测加入待测样品前后的荧光强度变化，对比标准曲线，得到待测样品中叶酸的含量，线性方程为F₀/F＝1.0589+0.0098C，F₀为不加入叶酸时的荧光强度检测值，F为加入叶酸后的荧光强度检测值，C为叶酸浓度，检出限为0.20μM，检测范围为0.50-200μM，磷酸缓冲水溶液3.1mL、铜纳米簇分散体系0.8mL和待测样品100μL组成叶酸检测体系4.0mL，磷酸缓冲水溶液浓度为0.01mol/L，25℃，pH＝7.4，铜纳米簇分散体系，以卵清蛋白为保护剂，水合肼为还原剂的铜纳米簇，按照下述步骤进行制备：

步骤1，称取60-160mg卵清蛋白溶解于装有3-8mL高纯水的烧杯中；

步骤2，向步骤1得到的溶液中加入0.02-0.18mL的0.1M氯化铜溶液，室温条件下搅拌8-12min；

步骤3，向步骤2得到的溶液中加入0.1-1.5mL水合肼水溶液，其中水合肼的质量百分数为80％后，向其中加入高纯水至8-20mL,并在室温条件下搅拌2-5h后，即得到铜纳米簇分散体系。

2.根据权利要求1所述的基于近红外荧光探针铜纳米簇的叶酸检测方法，其特征在于，在进行标准曲线的检测中，按照下述步骤进行：

步骤1，配置0.01mol/L，25℃，pH＝7.4磷酸缓冲水溶液；

步骤2，配置一系列浓度叶酸溶液

40mmol·L^-1叶酸溶液：称取0.0883g叶酸溶于高纯水中，定容5.0mL；以40mmol·L^-1叶酸溶液稀释配制0.1mM、0.2mM、0.4mM、0.6mM、0.8mM、1.0mM、2.0mM、3.0mM、4.0mM、6.0mM、10.0mM、14.0mM、16.0mM、20.0mM、26.0mM、30.0mM、36mM、40.0mM的叶酸溶液，对应4.0mL检测体系叶酸浓度分别为0.5μM、1.0μM、2.0μM、3.0μM、4.0μM、5.0μM、10.0μM、15.0μM、20.0μM、30.0μM、50.0μM、70.0μM、80.0μM、100.0μM、130.0μM、150.0μM、180.0μM、200.0μM；

步骤3，移取0.01mol/L PBS溶液3.1mL，加入0.8mL铜纳米簇分散体系，再加入100μL叶酸溶液，使用荧光光度计检测叶酸检测体系中添加叶酸前后的荧光强度，根据荧光强度相对变化建立标准曲线。