[发明专利]便捷的刺激NK细胞增殖和分化的饲养层制备方法在审
| 申请号： | 201610766711.9 | 申请日： | 2016-08-30 |
| 公开（公告）号： | CN107779433A | 公开（公告）日： | 2018-03-09 |
| 发明（设计）人： | 翟雷垒 | 申请（专利权）人： | 天津市康婷生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 天津盛理知识产权代理有限公司12209 | 代理人： | 赵瑶瑶 |
| 地址： | 300200 天津市西青区西青经*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 便捷 刺激 nk 细胞 增殖 分化 饲养 制备 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种便捷的刺激NK细胞增殖和分化的饲养层制备方法，其特征在于：步骤如下：
⑴采集50mL外周血；
⑵采用ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞；
⑶使用贴壁法分离淋巴和单核细胞，贴壁1个小时；
⑷淋巴细胞添加因子培养NK细胞；
⑸单核细胞添加因子，过夜培养；GM-CSF1000U/mL和IL-4400U/mL；
⑹第二天将单核细胞瓶中悬浮及半贴壁的的iDC重悬，移至新瓶中添加自体血浆培养，用于DC疫苗的制备，原瓶中继续补充因子，补充因子为GM-CSF和IL-4，不添加血浆，进行饥饿培养；
⑺隔天补充因子，补充因子为GM-CSF1000U/mL和IL-4400U/mL，至第五天，巨噬细胞铺满瓶底，此时去除上清，将培养中的NK细胞移入该瓶中进行共培养；
⑻十天后可以收集细胞。
2.根据权利要求1所述的便捷的刺激NK细胞增殖和分化的饲养层制备方法，其特征在于：所述NK细胞代替为CIK或其他T淋巴细胞。
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