[发明专利]检测细胞分泌细胞因子的试剂盒、其制备方法及检测方法

权利要求书

1.一种检测细胞分泌细胞因子的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括双功单抗、标记单抗、抗右旋-藻红蛋白微珠；所述双功单抗通过配置抗待测细胞膜上分子单抗和抗所述待测细胞分泌的细胞因子单抗偶联而成。

2.根据权利要求1所述的一种检测细胞分泌细胞因子的试剂盒，其特征在于，所述标记单抗根据所述待测细胞因子而配置标记磁珠和流式检测显色荧光基团的单抗。

3.根据权利要求2所述的一种检测细胞分泌细胞因子的试剂盒，其特征在于，双功单抗∶标记单抗∶抗右旋-藻红蛋白微珠为100ng∶10ng∶50ul；

所述双功单抗为冻干粉；所述标记单抗为冻干粉。

4.一种根据权利要求1-3任意一项所述的检测细胞分泌细胞因子的试剂盒的制备方法，其特征在于，该方法包括步骤：

按照双功单抗∶标记单抗∶抗右旋-藻红蛋白微珠为100ng∶10ng∶50ul的比例分别取样；

将取样后的双功单抗、标记单抗、抗右旋-藻红蛋白微珠独立地置于包装容器内，即得。

5.一种根据权利要求1-3任意一项所述的检测细胞分泌细胞因子的试剂盒的检测方法，其特征在于，所述的检测方法包括如下步骤：(1)准备待测细胞，所述待测细胞的细胞混悬液浓度为1×10⁷/ml以下；(2)洗涤所述细胞混悬液中的待测细胞；(3)负载双功单抗：将洗涤后的待测细胞置于试管；加4℃缓冲液至10ml，300g，4-8℃离心10分钟，弃去上清液；每4℃培养液悬浮；加2双功单抗试剂混匀，置4-8℃的冰上5分钟；(4)细胞因子分泌期：取待测细胞培养液于37℃稀释步骤(3)所述负载双功单抗后的待测细胞；将稀释后的待测细胞置试管于37℃CO₂培养箱中进行孵育，连续震荡或每5分钟摇匀一次；(5)标记单抗负载细胞：将步骤(4)孵育后的试管置于4-8℃冰上；加入4℃缓冲液洗细胞，300g 10分钟4-8℃离心，弃去上清液；再加4℃缓冲液混悬细胞；加标记抗体；混匀，4℃孵育10分钟；加4℃缓冲液洗细胞，300g 10分钟4-8℃离心，弃去上清液；(6)用抗右旋-藻红蛋白微珠标记磁化；(7)磁化分离；(8)流式细胞仪检测、分析待测细胞及待测细胞分泌的细胞因子。

6.根据权利要求5所述的一种检测细胞分泌细胞因子的试剂盒的检测方法，其特征在于，步骤(6)用抗右旋-藻红蛋白微珠标记磁化：加4℃缓冲液混悬步骤(5)负载标记单抗后的细胞；加抗右旋-藻红蛋白微珠，混匀，4-8℃孵育15分钟；加4℃缓冲液洗细胞，300g 10分钟4℃离心，弃去上清液；用4℃缓冲液混悬细胞；流过磁性分离器。

7.根据权利要求5所述的一种检测细胞分泌细胞因子的试剂盒的检测方法，其特征在于，步骤(7)磁化分离：准备两种管冲洗缓冲液；置第一管进磁化区域；传步骤(6)所得的细胞通过预分离滤器去除细胞块；放细胞混悬液进管；收集未标记细胞；移开磁化，放第二管进分离器到第一个管下面；用4℃缓冲液冲管，洗出标记细胞；收集标记细胞。