[发明专利]一种免疫细胞冻存液、其制备方法、冻存方法及应用

权利要求书

1.一种免疫细胞冻存液，所述免疫细胞冻存液组分包括：DMSO、丙二醇、海藻糖、甲基纤维素、谷胱甘肽、丙酮酸钠、人供体血浆；其重量比为：

5％～15％DMSO、1％～5％丙二醇、2％～8％海藻糖、3％～8％甲基纤维素、0.3％～1.2％谷胱甘肽、0.06％～0.14％丙酮酸钠、60％～80％人供体血浆。

2.根据权利要求1所述的一种免疫细胞冻存液，其特征在于，所述免疫细胞冻存液组分包括：8％～12％DMSO、2％～4％丙二醇、3％～6％海藻糖、4％～7％甲基纤维素、0.5％～1％谷胱甘肽、0.08％～0.12％丙酮酸钠、74％～78％人供体血浆；优选地，10％DMSO、3％丙二醇、5％海藻糖、6％甲基纤维素、0.8％谷胱甘肽、0.1％丙酮酸钠、75.1％人供体血浆。

3.根据权利要求1或2所述的一种免疫细胞冻存液，其特征在于，所述甲基纤维素为甲基纤维素1500cp。

4.一种根据权利要求1或2所述免疫细胞冻存液的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)制备人供体血浆；(2)按重量比称取各组分，将称取的丙二醇、海藻糖、甲基纤维素、谷胱甘肽、丙酮酸钠和人供体血浆先混合均匀，再立即与DMSO混合，过滤，2-8℃预冷，即得所述免疫细胞冻存液。

5.根据权利要求4所述免疫细胞冻存液的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述制备人供体血浆的方法：通过将抗凝外周血离心，吸取上层血浆，水浴，再离心，弃沉淀，即获得所述人供体血浆。

6.根据权利要求5所述免疫细胞冻存液的制备方法，其特征在于，所述再离心的条件为15000rpm，离心5min。

7.一种免疫细胞的冻存方法，其特征在于，包括：(a)获取免疫细胞；(b)免疫细胞混悬液制备：将所述权利要求1至2任一项所述的免疫细胞冻存液2-8℃预冷，缓慢加入到步骤(a)的免疫细胞里，混匀，即得所述免疫细胞混悬液；(c)将所述免疫细胞混悬液依次在4℃放置40-50min，-20℃放置30-60min，-80℃放置12h-15h，最后置于液氮中保存。

8.根据权利要求7所述的一种免疫细胞的冻存方法，其特征在于，步骤(c)将所述免疫细胞混悬液依次在4℃放置40min，-20℃放置30min，-80℃放置12h，最后置于液氮中保存。

9.一种根据权利要求1或2任一项所述的免疫细胞冻存液在冻存免疫细胞中的应用。

10.根据权利要求9所述的一种免疫细胞冻存液在冻存免疫细胞中的应用，其特征在于，所述免疫细胞为人单个核细胞及各类免疫细胞，优选地，CIK细胞或NK细胞。