[发明专利]疫苗组合物及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白片段、或其保守性变异体、或其活性片段，该gB蛋白片段表达量高，其制备的亚单位抗原免疫效果较gB蛋白更好。本发明还提供了串联表达该gB蛋白片段和gD蛋白制备的亚单位疫苗，该疫苗制备方法简单，针对牛传染性鼻气管炎病毒引起的牛传染性鼻气管炎有着更好的保护作用。

技术领域

本发明属于兽用生物制品领域，具体涉及亚单位疫苗组合物及其制备方法，以及该疫苗组合物的应用。

背景技术

牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious Bovine Rhinotracheitis Virus,IBRV)又名牛疱疹病毒1型(Bovine Herpesvirus 1,BHV-1),是牛的一种重要病原体，其引起的牛传染性鼻气管炎，是牛的一种急性、热性、接触性传染病。由牛传染性鼻气管炎病毒导致的细胞免疫降低和免疫抑制，常引起继发性细菌感染，给该病的临床诊断造成困难。世界动物卫生组织(OIE)将牛传染性鼻气管炎列为B类动物疫病。

疫苗接种是预防、控制甚至消灭牛传染性鼻气管炎的主要措施之一。亚单位疫苗不含有核酸物质，安全性较好，接种后不会产生持续感染或潜伏感染，产生的免疫应答可以与野毒感染相区分，有利于疫病的控制和消灭，然而，目前研究的牛传染性鼻气管炎病毒亚单位疫苗生产成本高，生产效率低，免疫原性不及弱毒疫苗及灭活疫苗，应用受到限制。

因此研制一种生产成本低、生产效率高以及疫苗免疫效果好的牛传染性鼻气管炎病毒亚单位疫苗的生产方法具有重要的现实意义。

发明内容

为了解决现有技术的不足，本发明提供了牛传染性鼻气管炎病毒亚单位疫苗组合物及其制备方法，通过动物实验证明所述疫苗组合物对于牛传染性鼻气管炎具有良好的免疫作用。

本发明的第一方面在于提供一种核苷酸序列，所述核苷酸序列由以下序列顺序连接组成：

对应于牛传染性鼻气管炎病毒Cooper株gB蛋白基因202-357位核苷酸序列、955-1320位核苷酸序列、1423-1509位核苷酸序列、2230-2289位核苷酸序列，上述四段核苷酸序列之间用柔性linker连接。

本发明的第二方面在于提供一种牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白片段、或其保守性变异体、或其活性片段，其中所述gB蛋白片段由上述的核苷酸序列编码。

利用该gB蛋白片段、或其保守性变异体、或其活性片段可制备亚单位疫苗，其对于由牛传染性鼻气管炎病毒引起的牛传染性鼻气管炎有着良好的保护作用，其免疫原性较gB蛋白抗原更优。

本发明的第三方面在于提供一种牛传染性鼻气管炎病毒gB-gD蛋白，其中，所述gB-gD蛋白包括上述的gB蛋白片段、或其保守性变异体、或其活性片段以及gD蛋白。利用该gB-gD蛋白可制备亚单位疫苗，其对于由牛传染性鼻气管炎病毒引起的牛传染性鼻气管炎有着更好的保护作用。

本发明的第四方面在于提供一种牛传染性鼻气管炎病毒亚单位疫苗组合物，其中，所述亚单位疫苗组合物包含免疫量的上述gB蛋白片段、或其保守性变异体、或其活性片段，和药学上可接受的载体；所述gB蛋白片段的保守性变异体、或其活性片段保持与所述gB蛋白片段相同的免疫原性。

本发明的第五方面在于提供一种牛传染性鼻气管炎病毒亚单位疫苗组合物，其中，所述亚单位疫苗组合物包含免疫量的上述gB-gD蛋白以及药学上可接受的载体。

本发明的第六方面在于提供一种制备本发明所述的牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白片段亚单位疫苗组合物的方法，其中，所述方法包括：1)克隆本发明所述gB蛋白片段、或其保守性变异体、或其活性片段的核苷酸序列；2)表达所述步骤1)中克隆的核苷酸序列，得到所述gB蛋白片段、或其保守性变异体、或其活性片段，以及3)在所述步骤2)中获得的所述gB蛋白片段、或其保守性变异体、或其活性片段中，添加药学上可接受的载体，制备所述亚单位疫苗组合物。