[发明专利]用于检测去势抵抗性前列腺癌的ELISA试剂盒及使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫测定法，具体是一种用于检测去势抵抗性前列腺癌的ELISA试剂盒及使用方法。

背景技术

前列腺癌是男性泌尿系统最常见的恶性肿瘤，在欧美国家较为常见，是男性最常见的恶性肿瘤，占所有恶性肿瘤的第二位。我国是传统的前列腺癌发病率较低的国家，但是近年来随着人民生活水平的提高，环境的改变，以及疾病筛查普及率的提高，我国的前列腺癌发病率正在逐年上升。前列腺癌已成为威胁我国男性健康的一种重要疾病，正在受到越来越多的关注和重视。

前列腺癌最重要的治疗方式之一就是去势疗法，包括药物抗雄激素治疗以及手术去势治疗，以阻止雄激素结合到雄激素受体上的方式来抑制肿瘤的生长。在前列腺癌早期，去势治疗有较好的效果，但是经过一段时间的治疗之后，前列腺癌逐渐转变为雄激素非依赖性的，对去势治疗不再敏感，病情再度恶化，即去势抵抗性前列腺癌（CRPC）阶段。去势抵抗性前列腺癌的发病机制目前尚不清楚，也没有较好的治疗方法，是前列腺癌基础与临床领域的难题。

目前对于去势抵抗性前列腺癌的诊断并没有很好的方法，主要是依靠监测前列腺特异性抗原和睾酮的变化，以及根据临床表现来综合判断，缺乏较好的特异性，不能准确地判断出去势抵抗性前列腺癌。及早地发现去势抵抗性前列腺癌，对后期治疗策略的制定和对前列腺癌更加深入地从分子水平认识，有着非常重要的意义。

发明内容

本发明就是为了解决现有技术中检测去势抵抗性前列腺癌的产品或方法特异性差、准确性不高的问题，所提出的一种用于检测去势抵抗性前列腺癌的ELISA试剂盒及使用方法。

本发明是按照以下技术方案实现的。

一种用于检测去势抵抗性前列腺癌的ELISA试剂盒，所述试剂盒包括ACTG1抗体，以及双抗体夹心ELISA法所需的检测试剂。

一种用于检测去势抵抗性前列腺癌的ELISA试剂盒，所述试剂盒包括包被ACTG1抗体的ELISA 酶标板、标准品、标准品&样品稀释液、生物素标记的ACTG1抗体、亲和素标记的辣根过氧化物酶、洗涤液、底物溶液、反应终止液、覆膜中的一种或几种。

检测样本为前列腺癌患者的血清。

一种上述用于检测去势抵抗性前列腺癌的ELISA试剂盒的使用方法，包括以下步骤：

Ⅰ.采集前列腺癌患者全血样品，离心取上清；

Ⅱ.分别设空白孔、标准孔、待测样品孔，空白孔加标准品&样品稀释液，余孔分别加标准品或待测样品，混匀；酶标板加覆膜，孵育；

Ⅲ.弃去孔内液体，甩干；每孔加入生物素标记的ACTG1抗体，酶标板加覆膜，温育；

Ⅳ.弃去孔内液体，甩干，洗涤酶标板，再甩干；

Ⅴ.每孔加入亲和素标记的辣根过氧化物酶，酶标板加覆膜，温育；

Ⅵ. 弃去孔内液体，甩干，洗涤酶标板，再甩干；

Ⅶ.每孔加入底物溶液，酶标板加覆膜，避光孵育；

Ⅷ.每孔加入反应终止液；

Ⅸ. 450nm波长下测量各孔的OD值；

Ⅹ.根据标准品的OD值计算血清样本ACTG1的检测值，并判断其与判定阈值的大小关系。

所述步骤Ⅰ中全血样品于室温放置0~4小时或0~8℃过夜后于500~1500×g离心10~30分钟。

所述步骤Ⅳ中洗涤酶标板1~5次，每次浸泡1-2分钟；步骤Ⅵ中洗涤酶标板3~7次，每次浸泡1-2分钟。

所述步骤Ⅳ中洗涤酶标板3次，每次浸泡1.5分钟；步骤Ⅵ中洗涤酶标板5次，每次浸泡1.5分钟。

所述判定阈值为78174.25mg/ml~ 95546.31 mg/ml。

所述判定阈值为86860.28mg/ml。

本发明获得了以下有益效果。

本发明有效的解决了现有技术中检测去势抵抗性前列腺癌的产品或方法特异性差、准确性不高的问题。本发明试剂盒根据血清中ACTG1的含量来诊断去势抵抗性前列腺癌，具有较高的灵敏度和特异度。本发明试剂盒操作简单快速、合理可行，可提高去势抵抗性前列腺癌的诊断效率，具有广阔的应用前景。

附图说明

图1是本发明非去势抵抗性前列腺癌和去势抵抗性前列腺癌患者血清中ACTG1检测值的统计学结果图；

图2是本发明以血清ACTG1水平来诊断去势抵抗性前列腺癌的ROC曲线图。

具体实施方式

下面结合附图及实施例对本发明做进一步的说明。