[发明专利]铁皮石斛优质种苗自然光培养一次成苗快速繁殖方法

权利要求书

1.铁皮石斛优质种苗自然光培养一次成苗快速繁殖方法，其特征在于包含以下步骤：

（1）准备铁皮石斛材料；

（2）建造全自然光培养室

使用透光材料，并配备遮阳系统、降温设备和培养架，通过遮阳系统确保培养室内顶层培养架的光照强度为3000～5000 Lux，光照强度随着培养架的层数下移而降低，底层培养架的光照强度为100～1000 Lux，顶层往下的第二、三层培养架光照强度为1000～3000Lux，降温设备将玻璃培养室的温度控制在20～30°C，培养架长度根据培养室的大小而定；

（3）制作种子悬浮液

于铁皮石斛种质圃中，选取生长健壮、萌芽率高、抗逆性、抗病虫害强的健康株系，于开花季节进行人工授粉并套袋，选取一定范围果龄的蒴果为外植体，进行消毒、清洗和除水，接着用无菌手术刀切开蒴果，将蒴果内的种子全部洗脱至一装有无菌水的瓶中，每个蒴果的种子对应洗脱至一个瓶，制成种子悬浮液，对每个蒴果种子悬浮液进行种子密度的检测，根据每瓶悬浮液种子浓度用无菌水进一步稀释成种子浓度为10-15粒/毫升的接种用的种子悬浮液；

（4）无菌播种

无菌条件下用移液枪吸取接种用的种子悬浮液2毫升至装有150毫升的一次成苗固体培养基的兰花培养瓶中，每瓶铁皮石斛的种子数量20-30粒，所述一次成苗固体培养基的成分如下：花宝1号1～2g/L，花宝2号1～2g/ L，蛋白胨 0.5～2g/ L，土豆泥 40～80 g/ L，香蕉泥50～100g/ L，苹果泥10～20g/ L，活性碳 500~1000mg/ L，肌醇80~120mg/ L，甘氨酸1.5~2.5mg/ L，盐酸硫胺素0.05~0.2mg/ L，盐酸吡哆醇0.4~0.8mg/ L，烟酸0.4~0.8mg/ L，6-苄基嘌呤0.05~0.1mg/ L，萘乙酸0.2~2mg/ L，蔗糖 15～30g/ L，琼脂6～7g/ L，pH 5.4-5.6；

（5）一次成苗培养

原球茎诱导培养：将种子悬浮液均匀分布培养基表面上，将此培养瓶放置全自然光培养室中的培养架上，保持其光照强度在100～1000 Lux，保持培养室温度在(26±2)℃，此条件下培养60～90天，种子萌发形成原球茎，原球茎长出根和叶片；

小苗培养：将小苗移动至培养架的合适层，加强其自然光照培养，促进小苗生长，此时期培养时间为90天，培养温度为(26±2)℃，小苗长成大苗，苗高3～5cm，3～5片叶片，3～5条根须，根长1～3厘米；大苗基部萌发出1-2个新苗，形成丛生苗；

大苗培养：将大苗移动至培养架的顶层，在高自然光光强下进行培养，既可以促进大苗的生长，又可以达到炼苗的效果，此时期培养60天，培养温度为(26±2)℃，此时铁皮石斛苗每丛2－5苗，苗高5 ～8cm，有4-6节，4片以上叶片，3条以上根，茎粗2.0mm以上，达到出苗的标准；

（6）试管苗的移栽

移栽时，从培养瓶中取出生根苗，洗净附着的培养基后，用千分之一的高锰酸钾溶液浸泡5 min，然后将生根苗晾干至根变白，种植基质采用已经消毒处理的树皮，注意保持适宜湿度和温度，置于阴凉通风处栽培，30 天左右成活后的植株能产生新的根系，此时移入大棚进行正常水、肥、药管理。

2.根据权利要求1所述的铁皮石斛优质种苗自然光培养一次成苗快速繁殖方法，其特征在于步骤（3）中所述一定范围果龄优选为120天。

3.根据权利要求1所述的铁皮石斛优质种苗自然光培养一次成苗快速繁殖方法，其特征在于步骤（3）中所述消毒、清洗和除水具体为在70%酒精中浸泡30秒，再用0.1%升汞溶液消毒15~20分钟，无菌水冲洗4~5次，于超净工作台上无菌条件下用无菌滤纸吸干蒴果表面的水分。

4.根据权利要求1所述的铁皮石斛优质种苗自然光培养一次成苗快速繁殖方法，其特征在于步骤（3）中所述种子密度的检测是指对每个蒴果种子悬浮液进行种子密度的检测，具体过程为在摇匀情况下用无菌移液枪吸取20微升于生物显微镜下计算其种子数量，每瓶种子悬浮液重复取10次计算其平均每毫升种子数。