[发明专利]半自动样本处理液相色谱技术测定水溶性维生素的方法

权利要求书

1.一种利用半自动样本处理液相色谱技术同时测定血清中多种水溶性维生素的方法，其特征在于：采用HPLC方法；所述水溶性维生素为维生素B1、B2、B6、B9、B12、维生素C、烟酸和烟酰胺；所述血清进行以下前处理：先用甲醇或乙腈沉淀蛋白，离心后取上清液，用半自动固相萃取仪萃取，洗脱液为：甲醇水溶液，收集的柱后溶液进行氮气吹干至合适体积，然后进样分析；

色谱条件为：柱温：30℃；色谱柱:Waters XBridge C18 3.5um 4.6*250mm；进样体积：20uL；流动相A：磷酸二氢钾溶液，流动相B：甲醇；梯度洗脱条件为：0-5min A:B＝90:10，5-7min过渡B为50％，7-12min A：B＝50:50,12-14min过渡B为30％，14-18min A：B＝70:30，18-22min过渡B为10％，流速：0.9mL/min；波长为260nm。

2.根据权利要求1所述的利用半自动样本处理液相色谱技术同时测定血清中多种水溶性维生素的方法，其特征在于：步骤如下：

(1)样品前处理：向血清样本中加入等体积的乙腈，涡旋震荡后离心，取上清液至半自动固相萃取仪，用甲醇水溶液洗脱；收集的柱后溶液氮气吹干至合适体积；

(2)标准工作液的配制：配制多种水溶性维生素的标准工作液，备用；

(3)HPLC检测：将待测样本通过梯度洗脱模式进入色谱柱分离后，在260nm检测波长下，对待测物质进行定性与定量检测。

3.根据权利要求2所述的利用半自动样本处理液相色谱技术同时测定血清中多种水溶性维生素的方法，其特征在于：所述标准工作液的配制具体如下：以水配制100μg/mL各维生素标准品储备液，然后用浓度为5％的BSA甲醇溶液制备不同浓度梯度的标准溶液。