[发明专利]半自动样本处理液相色谱技术测定水溶性维生素的方法

说明书

本发明公开了一种利用半自动样本处理液相色谱技术同时测定血清中多种水溶性维生素的方法，采用HPLC方法，色谱条件为：流动相A：磷酸二氢钾溶液，流动相B：甲醇，梯度洗脱；所述多种水溶性维生素选自维生素B1、B2、B6、B9、B12、维生素C、烟酸或烟酰胺。对血清进行前处理：先用甲醇或乙腈沉淀蛋白，离心后取上清液，用半自动固相萃取仪萃取，洗脱液为甲醇水溶液，收集的柱后溶液进行氮气吹干至合适体积。本发明采用高效液相色谱法检测血清中多种水溶性维生素，可以实现定性与定量检测，特异性强，灵敏性高，通量高，操作简单，成本低，结果客观易于分析，尤其适合临床普及应用。

技术领域

本发明涉及一种利用半自动样本处理液相色谱技术同时测定血清中多种水溶性维生素的方法，属于维生素检测技术领域。

背景技术

维生素是机体维持正常代谢和机能所必须的一类低分子化合物，是人体七大营养要素之一，分为脂溶性和水溶性维生素两类，人体内维生素必须保持在一个合适的范围才对人体有益，无论缺乏还是升高都会给人体带来危害。维生素B1、B2、B6、B9、B12、维生素C、烟酸、烟酰胺均属于水溶性维生素，人体缺乏该这些维生素时会表现出不同的症状：B1缺乏易致脚气病等，B2缺乏致脂溢性皮炎和口腔炎症，B6缺乏易导致贫血，B9叶酸缺乏致胎儿神经管畸形；B12缺乏致巨幼红细胞性贫血；烟酰胺缺乏会导致食欲不振、记忆力减退、痴呆等。

近年来，国内外对维生素认识的重要性在不断提高，根据统计，维生素在美国保健品市场占有主要份额。随着国际维生素市场对中国乃至亚洲市场的不断冲击，以及国内科研单位和企业在维生素行业取得的科研成果和技术突破，我国公民自身的保健意识不断增强，随着居民收入水平提高，人们开始补充各类维生素。但是，由于缺乏科学的指导，维生素产品的使用现状很混乱，一些人群为了提高身体各项机能，不惜花重金在保健品上，盲目补充维生素，据2014年中国营养学会调查显示，中国居民由于营养过剩或营养不均衡导致的疾病在逐年增多。如何了解人体是否需要补充所必需的水溶性维生素，只有通过检测体内各种维生素的真实状态，根据检测结果有针对性的调整需要的维生素，检测是科学评估和个性化使用维生素唯一的依据。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种利用半自动样本处理液相色谱技术同时测定血清中多种水溶性维生素的方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种利用半自动样本处理液相色谱技术同时测定血清中多种水溶性维生素的方法，采用HPLC方法，色谱条件为：流动相A：0.5mol/L的磷酸二氢钾溶液(在流动相中加入磷酸二氢钾有利于提高分离度，使各种维生素能够较好的分离)，流动相B：甲醇，梯度洗脱；所述水溶性维生素选自维生素B1、B2、B6、B9、B12、维生素C、烟酸、烟酰胺中任意三种以上。

所述血清，进行以下前处理：先用甲醇或乙腈沉淀蛋白(优选乙腈)，离心后取上清液，用半自动固相萃取仪萃取(现有技术中已有的常规设备)，洗脱液为：甲醇水溶液，对收集的柱后溶液进行氮气吹干至合适体积，然后进样分析。

进一步地，色谱条件为：柱温：30℃；色谱柱:Waters XBridge C183.5um 4.6*250mm；进样体积：20uL；梯度洗脱条件为：0-5min A:B＝90:10，5-7min过渡B为50％，7-12min A：B＝50:50,12-14min过渡B为30％，14-18min A：B＝70:30，18-22min过渡B为10％，如表1所示，流速：0.9mL/min；波长为260nm。

表1梯度洗脱条件