[发明专利]一种人博卡病毒1型抗体间接ELISA诊断试剂盒

权利要求书

1.一种人博卡病毒1型抗体间接ELISA诊断试剂盒，其特征在于：包括包被抗原的ELISA抗体检测板和酶标二抗；所述的抗体检测板上包被的抗原为人博卡病毒1型结构蛋白VP2的N端210个氨基酸的截短蛋白。

2.根据权利要求1所述的人博卡病毒1型抗体间接ELISA诊断试剂盒，其特征在于：所述的抗体检测板抗原的包被量为1μg/孔。

3.根据权利要求1所述的人博卡病毒1型抗体间接ELISA诊断试剂盒，其特征在于：所述的酶标二抗为羊抗人酶标二抗。

4.根据权利要求1所述的人博卡病毒1型抗体间接ELISA诊断试剂盒，其特征在于：包括洗涤液、显色液、终止液。

5.根据权利要求1所述的人博卡病毒1型抗体间接ELISA诊断试剂盒，其特征在于：所述的人博卡病毒1型结构蛋白VP2的N端210个氨基酸的截短蛋白通过包括如下步骤的方法制备：

（1）以人博卡病毒1型基因组DNA为模板，用如下引物进行PCR扩增：

上游引物：CGAGCTCTCTGACACTGACATTCAAGA，

下游引物：CCCAAGCTTATTGCCTCCAGCTGCA；

（2）将扩增的PCR产物、表达载体pET28a(+)用Sac I、Hind III酶切后再连接，构建原核表达载体pET28a-VP2N；

（3）用原核表达载体pET28a-VP2N转化大肠杆菌BL21，将阳性重组菌进行诱导表达、纯化得到目的蛋白。

6.根据权利要求5所述的人博卡病毒1型抗体间接ELISA诊断试剂盒，其特征在于：步骤（3）中所述的诱导、表达为：将阳性重组菌接种于含卡那霉素的LB 培养基中进行IPTG诱导表达；收集表达的宿主菌并超声裂解，用8M尿素溶解包涵体并用滤膜过滤，经镍琼脂糖凝胶亲和层析纯化得到目的蛋白。