[发明专利]他喷他多手性中间体的制备方法

权利要求书

1.他喷他多手性中间体（S）-4-（3-甲氧基苯基）-3-甲基-4-羰基丁酸的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：

（1）以混旋4-（3-甲氧基苯基）-3-甲基-4-羰基丁酸为底物，在酮基还原酶作用下，添加葡萄糖、葡萄糖脱氢酶和辅酶，反应得到4-羟基-4-（3-甲氧基苯基）-3-甲基丁酸；

（2）加入碱性高锰酸钾，反应得到（S）-4-（3-甲氧基苯基）-3-甲基-4-羰基丁酸；

所述酮基还原酶的氨基酸序列如序列SEQ ID NO .11所示；

所述葡萄糖脱氢酶的氨基酸序列如序列SEQ ID NO .2所示。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述酮基还原酶由菌株生产得到，所述生产酮基还原酶的菌株为大肠杆菌（Escherichia coli. ）B102-133， 保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M2016101。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述葡萄糖脱氢酶由菌株生产得到，所述生产葡萄糖脱氢酶的菌株为大肠杆菌（Escherichia coli. ）A149-170，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M2016102。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其中，所述葡萄糖脱氢酶由菌株生产得到，所述生产葡萄糖脱氢酶的菌株为大肠杆菌（Escherichia coli. ）A149-170，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M2016102。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其中，第（1）步中所述反应过程中，还需添加缓冲溶液，所述缓冲溶液的pH值为6.5-7.5。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述葡萄糖的添加质量为底物的1-2.5倍。

7.根据权利要求2所述的制备方法，其中，所述葡萄糖的添加质量为底物的1-2.5倍。

8.根据权利要求3所述的制备方法，其中，所述葡萄糖的添加质量为底物的1-2.5倍。

9.根据权利要求4所述的制备方法，其中，所述葡萄糖的添加质量为底物的1-2.5倍。

10.根据权利要求5所述的制备方法，其中，所述葡萄糖的添加质量为底物的1-2.5倍。

11.根据权利要求1-10任一项所述的制备方法，其中，所述葡萄糖脱氢酶的添加质量为底物的0.5-1.5倍。

12.根据权利要求1-10任一项所述的制备方法，其中，所述酮基还原酶的添加质量为底物的0.6-1倍。

13.根据权利要求11所述的制备方法，其中，所述酮基还原酶的添加质量为底物的0.6-1倍。

14.根据权利要求1-10任一项所述的制备方法，其中，所述辅酶的添加量占底物的10wt%-15wt%，所述辅酶选自辅酶I NAD⁺ 和辅酶II NADP⁺中的一种或两种。

15.根据权利要求11所述的制备方法，其中，所述辅酶的添加量占底物的10wt%-15wt%，所述辅酶选自辅酶I NAD⁺ 和辅酶II NADP⁺中的一种或两种。

16.根据权利要求12所述的制备方法，其中，所述辅酶的添加量占底物的10wt%-15wt%，所述辅酶选自辅酶I NAD⁺ 和辅酶II NADP⁺中的一种或两种。