[发明专利]基于PPARγ信号通路的药物筛选模型的构建和应用

权利要求书

1.一种多核苷酸序列，选自：

(1)N1-(AGGTCA-N-AGGTCA)_m-N2；和

(2)(1)所示序列的互补序列；

其中，N1表示粘性末端序列，或不存在；N2表示粘性末端序列，或不存在；N为接头序列，长1－25个碱基，由选自A、G、T和C的碱基组成；m为1－50、优选3－25的整数。

2.如权利要求1所述的多核苷酸序列，其特征在于，所述多核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

3.一种载体，该载体含有权利要求1－2中任一项所述的多核苷酸序列和荧光素酶报告基因，优选地，权利要求1－2中任一项所述的多核苷酸序列位于所述荧光素酶报告基因的上游。

4.一种试剂盒，所述试剂盒含有权利要求3所述的载体，和任选的含PPARγ表达元件的慢病毒表达载体以及任选的将所述表达载体转入细胞所需的试剂；优选地，所述PPARγ表达元件的序列如SEQ ID NO:1所示。

5.一种细胞，所述细胞具有组成型PPARγ活性，转入了权利要求3所述的载体，并稳定表达荧光素酶；优选地，所述细胞还转入了含PPARγ表达元件的慢病毒表达载体；优选地，所述PPARγ表达元件的序列如SEQ ID NO:1所示。

6.如权利要求5所述的细胞，其特征在于，所述细胞为肝脏细胞、单核巨噬细胞和脂肪细胞，优选为人单核巨噬细胞THP-1细胞、人脂肪细胞3T3-L1、人肝癌细胞HepG2或人肝脏ChangLiver细胞。

7.一种以PPARγ为靶点的药物筛选细胞模型的构建方法，所述方法包括：

(1)提供权利要求3所述的载体，和任选地提供含PPARγ表达元件的慢病毒表达载体；

(2)将权利要求3所述的载体转入具有组成型PPARγ活性的细胞中；和

(3)任选地，将含PPARγ表达元件的慢病毒表达载体转入步骤(2)所得的细胞中。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法还包括

(A)在步骤(2)之后加入嘌呤霉素进行阳性克隆筛选以得到存活细胞的步骤，和任选的在所述筛选步骤之后对得到的每个克隆进行荧光素酶活性鉴定的步骤；和/或

(B)转入含有PPARγ表达元件的慢病毒表达载体之后，使用嘌呤霉素做阳性筛选得到存活的克隆细胞的步骤。

9.权利要求3所述的载体或权利要求4所述的试剂盒在制备以PPARγ为靶点的药物筛选细胞模型中的应用，或权利要求5－6中任一项所述的细胞在筛选PPARγ相关的抗动脉粥样硬化疾病相关的激动剂中的应用。

10.一种筛选抗动脉粥样硬化相关疾病的激动剂的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)提供权利要求5－6中任一项所述的细胞；

(2)使所述细胞与待筛选化合物接触；和

(3)加入荧光素酶底物，并根据荧光激活数据获得初筛化合物；

任选地，所述方法还包括对初筛得到的化合物进行细胞毒性MMT实验，基于所获得的荧光激活率，得到复筛化合物。